詳細(xì)介紹
熒光法定量PCR試劑盒主要有以下三種:
抗酸染色液(金胺O熒光法)
抗酸染色液(金胺O-羅丹明熒光法)
丙二醛(MDA)檢測(cè)試劑盒(TBA熒光法)
熒光法定量PCR試劑盒
PCR- SSCP 技術(shù)憑借突變可引起單鏈DNA三級(jí)構(gòu)象改變,通過(guò)觀察單鏈DNA在非變性聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率漂移來(lái)判斷突變。樣品經(jīng)PCR 擴(kuò)增后,其產(chǎn)物經(jīng)變性后可以產(chǎn)生2 條單鏈,如果存在基因突變,哪怕是一個(gè)堿基的異常,單鏈的構(gòu)象也會(huì)發(fā)生變化,正常與突變的DNA單鏈在聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE) 中,可以顯現(xiàn)出不同的帶型,從而確定野生型和突變型,PCR- SSCP 分析的主要優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)易且敏感性較高。但是該技術(shù)不能確定突變的部位和性質(zhì)。
PCR- SSCP 突變檢測(cè)敏感性隨PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度的增加而降低,一般用于檢測(cè)較小外顯子的突變。有時(shí)由于單個(gè)核苷酸變化所引起的構(gòu)象改變很小,用PAGE 電泳就可能無(wú)法檢出,在PCR 產(chǎn)物或待測(cè)DNA 小于200 bp 時(shí),PCR- SSCP 分析能夠檢測(cè)出70%~ 95%的突變。如果以毛細(xì)管電泳代替PAGE,則可大為提高突變檢測(cè)的效率。
PCR- 單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析(PCR- single strand conformation analysis,PCR- SSCP) 是近年來(lái)在基因突變檢測(cè)中運(yùn)用較廣泛的方法之一。
PCR- SSCP 有許多改進(jìn)技術(shù),如RNA單鏈構(gòu)象多態(tài)性法(PCR- rSSCP)、雙脫氧測(cè)序單鏈片段構(gòu)象多態(tài)分析(PCR- ddF)、限制酶指紋技術(shù)(PCR- REF) 等。PCR- rSSCP 法依據(jù)RNA構(gòu)象對(duì)單個(gè)堿基替代更敏感的原理,在PCR 引物上加上某類啟動(dòng)子,通過(guò)轉(zhuǎn)錄的RNA構(gòu)象體的電泳遷移差異進(jìn)行突變鑒別。PCR- ddF 法把PCR 產(chǎn)物轉(zhuǎn)錄,將轉(zhuǎn)錄物用反轉(zhuǎn)錄酶進(jìn)行Sanger 雙脫氧終止測(cè)序反應(yīng),通過(guò)觀察非變性膠上經(jīng)解鏈處理所產(chǎn)生的單鏈漂移、突變后終止片段的獲得與缺失來(lái)判斷突變。
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