制藥網(wǎng)一、實驗目的
本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，HPLC法作為分析方法，檢測飼料中苯甲酸含量。該方法可簡化樣品的前處理過程，節(jié)省有機溶劑的使用，操作簡便。
二、實驗目標物
苯甲酸 (CAS:65-85-0) 。
三、應用范圍
本方法適用于飼料中苯甲酸的檢測的HPLC檢測及確證。
四、參考標準
《NY/T 2297-2012 飼料中苯甲酸和山梨酸的測定 高效液相色譜法》。
五、實驗材料
biocomma®Copure® MAX 固相萃取柱60mg/3mL (Cat. No. COMAX360)。
六、實驗步驟
1、樣品提取
準確稱取飼料樣品2.0 g于50 mL離心管中，加入2% 氨水水溶液（v/v）21 mL，超聲提取10 min，振蕩提取10min，準確加入0.25 mol/L的溶液2 mL、1 mol/L的乙酸鋅溶液2 mL，渦旋混勻。5000 r/min離心5min，取上清液5 mL轉移至25 mL容量瓶中,用2% 氨水水溶液（v/v）定容至25 mL，備用。
2、SPE柱凈化
(1) 活化：MAX 固相萃取柱使用前用3 mL甲醇、3mL 水活化。
(2) 上樣和洗脫：在MAX固相萃取柱上加入5 mL備用樣品，棄去流出液；用3 mL 2% 氨水水溶液（v/v）、3mL甲醇淋洗，棄去淋洗液；抽干小柱；用5% 甲酸甲醇溶液（v/v）2 mL洗脫，收集洗脫液（整個上樣、洗脫過程保持流速1 mL/min）。
(3) 重新溶解：洗脫液過0.45 μm濾膜，上機測試。
3、HPLC條件
設 備：Waters Alliance 2695
色譜柱 ：Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250 mm, 5μm)
檢測器 ：Waters 2487 紫外檢測器
流動相 ：A：乙腈
B：磷酸鹽緩沖溶液（稱取磷酸二氫鉀 2.5g+
2.5g，加水溶解定容到1000mL）
洗脫方式：等度洗脫A:B=10:90
流速：1.0 mL/min
檢測波長：230 nm
進樣體積: 20 μL
七、實驗結果
1、25 mg/kg飼料中苯甲酸的添加回收結果
表1 25 mg/kg飼料中苯甲酸的添加回收結果
2、添加水平為25 mg/kg飼料中苯甲酸檢測的液相色譜圖
圖1 添加水平為25 mg/kg飼料中苯甲酸檢測的液相色譜圖