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體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)陽性對(duì)照品

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)陽性對(duì)照品由Hatano Research institute (HRI) 研究生產(chǎn)，廣泛應(yīng)用于體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)，可以滿足中國藥典-細(xì)胞毒性檢查方法、ISO 10993和YBB 00012003細(xì)胞毒性檢查法的參數(shù)要求。

詳細(xì)介紹

體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)陽性對(duì)照品使用常規(guī)培養(yǎng)基進(jìn)行浸提。浸提方法如下：無菌操作，取1g體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)陽性對(duì)照品放置于15mL無菌離心管中，按照3mL/g浸提比例加入浸提介質(zhì)培養(yǎng)基，水平放置振蕩，120rpm，37℃條件下浸提24h。浸提結(jié)束后上下顛倒混勻10次，取浸提液用于試驗(yàn)。浸提所用的培養(yǎng)基作為空白對(duì)照。注意配制好的培養(yǎng)基在4℃條件下貯存不超過兩周。體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)采用MTT法進(jìn)行檢測(cè)：取狀態(tài)良好的L929細(xì)胞，消化離心，配制成細(xì)胞懸液，接種于96孔培養(yǎng)板。每組設(shè)立多個(gè)復(fù)孔，每孔接種100µL細(xì)胞懸液，置37℃、5%二氧化碳的CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h。棄去原培養(yǎng)基，加入100µL浸提液、空白對(duì)照液，于CO2培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。24h后，于顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。棄去孔內(nèi)液體，每孔加入50µL1mg/mL的無菌MTT溶液（MTT用MEM培養(yǎng)基配置，現(xiàn)用現(xiàn)配，不可用培養(yǎng)基配制），繼續(xù)培養(yǎng)2h后棄去孔內(nèi)液體，加入100µL異丙醇，振蕩混勻，在570nm和650nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，計(jì)算細(xì)胞存活率。

細(xì)胞毒性試驗(yàn)是利用體外細(xì)胞培養(yǎng)的方法評(píng)價(jià)生物材料或浸提液潛在的細(xì)胞毒性，是生物材料生物學(xué)評(píng)價(jià)體系中重要的測(cè)定指標(biāo)之一，也是生物材料必須進(jìn)行檢測(cè)的項(xiàng)目。細(xì)胞毒性試驗(yàn)?zāi)茉诙唐趦?nèi)測(cè)試生物材料對(duì)細(xì)胞代謝功能的影響，可以快速篩選材料是否具有潛在的細(xì)胞毒性。

細(xì)胞毒性試驗(yàn)作為檢測(cè)生物材料毒性的手段，具有簡(jiǎn)便、敏感性高、成本低、試驗(yàn)周期短等優(yōu)點(diǎn)，廣泛用于生物材料產(chǎn)品的生物相容性檢測(cè)和評(píng)價(jià)手段。對(duì)生物材料細(xì)胞毒性的評(píng)價(jià)方法從觀察細(xì)胞的形態(tài)和數(shù)量變化，發(fā)展到對(duì)細(xì)胞的粘附、增殖、代謝等方面的評(píng)價(jià)，以有活力的細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞增殖能力作為評(píng)價(jià)生物材料細(xì)胞生物相容性的評(píng)價(jià)方法。具體的試驗(yàn)有中性紅攝取試驗(yàn)、克隆形成試驗(yàn)、MTT細(xì)胞毒性試驗(yàn)和XTT細(xì)胞毒性試驗(yàn)等方法，其中以MTT和XTT細(xì)胞毒性試驗(yàn)方法，由于可以定量測(cè)定材料的細(xì)胞毒性，因此更為被大家接受并且應(yīng)用也更為廣泛。

MTT和XTT細(xì)胞毒性試驗(yàn)檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臢(Formazan)并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)或異丙醇或吩嗪硫酸甲酯(PMS)能溶解細(xì)胞中的甲臢結(jié)晶，用酶標(biāo)儀在570nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值，在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。根據(jù)測(cè)得的吸光度值(OD值)，來判斷活細(xì)胞數(shù)量，OD值越大，細(xì)胞活性越強(qiáng)，毒性越小。通過計(jì)算細(xì)胞的增殖率，可以定量分級(jí)評(píng)價(jià)材料及其制品的細(xì)胞毒性。也可以通過浸提液的不同濃度稀釋情況下細(xì)胞的存活度計(jì)算IC50(細(xì)胞活度抑制50％的濃度)，評(píng)價(jià)生物材料及其制品的細(xì)胞毒性。

體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)陽性對(duì)照品具有批次重現(xiàn)性好，性能穩(wěn)定、規(guī)格大小豐富的特點(diǎn)，可以作為生物學(xué)評(píng)價(jià)-細(xì)胞毒性測(cè)定的理想材料。

關(guān)鍵詞：對(duì)照品離心管顯微鏡