兔子腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒實驗使用說明書

　　BS-4142 兔子腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒

　　一、實驗原理

　　本試劑盒采用雙抗體夾心法測定兔血清、血漿等樣本中TNF-α濃度。通過預(yù)包被TNF-α抗體的微孔板與樣本中抗原結(jié)合，再與HRP標(biāo)記的二抗形成復(fù)合物，經(jīng)TMB底物顯色后，通過450nm波長測定吸光度(OD值)，標(biāo)準(zhǔn)曲線計算濃度。

　　二、試劑盒組成

　　組分規(guī)格(96T)儲存條件

　　預(yù)包被微孔板1塊(96孔)4℃(短期)/-20℃(長期)

　　標(biāo)準(zhǔn)品(TNF-α)1瓶(1.0mL)-20℃避光保存

　　HRP標(biāo)記抗體1瓶(8.0mL)4℃避光

　　TMB底物液1瓶(6.0mL)4℃避光

　　終止液1瓶(6.0mL)室溫

　　三、實驗步驟

　　樣本處理

　　血清/血漿：4℃靜置2小時或過夜，1000×g離心20分鐘，取上清分裝保存(-20℃≤1個月，-80℃≤2個月)。

　　避免溶血或反復(fù)凍融。

　　檢測流程

　　加樣：標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋(1.37-1000pg/mL)及樣本各100μL/孔，37℃孵育90分鐘。

　　洗滌：PBST洗滌3次，每次拍干。

　　顯色：加入TMB底物避光反應(yīng)15分鐘，終止液終止后30分鐘內(nèi)測OD值。

　　四、注意事項

　　試劑使用前需平衡至室溫，不同批次不可混用。

　　酶標(biāo)儀預(yù)熱至450nm，建議雙孔復(fù)測以減少誤差。

　　顯色液避免強光照射，終止后及時讀數(shù)。

　　五、結(jié)果分析

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度(pg/mL)為橫坐標(biāo)、OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，樣本濃度通過曲線擬合值乘以稀釋倍數(shù)計算。

　　六、儲存與有效期

　　未開封試劑盒：按標(biāo)簽溫度保存(-20℃或4℃)，有效期12個月。

　　已拆封微孔板：需干燥劑密封保存于-20℃，建議1個月內(nèi)用完。

　　注：以上資料僅供參考，不作為實驗依據(jù)，具體產(chǎn)品說明請咨詢品牌供應(yīng)商或技術(shù)老師。

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