BUNSEN技術分享：ELISA實驗中緩沖溶液等試劑的配置

　　所有試劑配置全程使用無熱源、無內毒素的去離子水，所有pH值誤差控制在±0.05范圍內，從根源上避免因試劑偏差導致的實驗背景偏高、信號不均問題。

　　1. 包被緩沖液(pH 9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液)

　　精準配方：稱取?1.59g無水碳酸鈉? + ?2.93g碳酸氫鈉?，加去離子水溶解后定容至1000mL，微調pH至9.6。

　　配置要點：該緩沖液疏水表面更利于蛋白吸附，是ELISA包被的金標準體系，4℃密封可保存1個月，若出現渾濁需立即重新配制。

　　適配場景：絕大多數抗原/抗體的固相包被，若目標蛋白對高pH敏感，可替換為pH7.6的0.01M磷酸鹽緩沖液替代。

　　2. 洗滌緩沖液(pH 7.4 PBST)

　　精準配方：稱取?8.0g NaCl? + ?0.2g KCl? + ?2.9g Na?HPO?·12H?O? + ?0.2g KH?PO??，溶解后加入?0.5mL Tween-20?，定容至1000mL，調pH至7.4。

　　配置要點：Tween-20濃度嚴格控制在0.05%，濃度過高會破壞已結合的抗原抗體復合物，濃度過低則無法洗去非特異性吸附;室溫密封可保存3個月，若出現鹽結晶，37℃水浴溶解后再使用。

　　3. 樣本/抗體稀釋液

　　基礎配方：稱取?1g BSA?，溶于100mL上述PBST緩沖液中，配制成1% BSA稀釋液。

　　配置要點：磷酸化蛋白檢測絕對禁止使用脫脂奶粉作為稀釋成分(奶粉含磷酸化酶會干擾結果);普通檢測可替換為5%脫脂奶粉-PBST，進一步降低非特異性背景，建議現配現用。

　　4. 底物緩沖液(pH 5.0 檸檬酸-磷酸緩沖液)

　　精準配方：提前配制A液(0.1M檸檬酸：21.01g一水合檸檬酸定容至1000mL)、B液(0.2M Na?HPO?：71.63g十二水合磷酸氫二鈉定容至1000mL);取A液24.3mL + B液25.7mL，加去離子水定容至100mL，調pH至5.0。

　　配置要點：該緩沖液是HRP酶促反應的pH環(huán)境，4℃密封可保存2個月，使用前需提前恢復至室溫。

　　5. TMB顯色工作液

　　精準配方：取?0.5mL TMB母液(10mg/5mL無水乙醇)? + ?10mL pH5.5底物緩沖液? + ?32μL 0.75% H?O??，充分混勻。

　　配置要點：必須?現配現用、全程避光?，H?O?需使用新鮮開啟的試劑，避免氧化失效導致顯色極弱;配好后1小時內必須使用完畢。

　　6. 終止液(2M H?SO?)

　　精準配方：量取?178.3mL去離子水?，緩慢逐滴加入?21.7mL 98%濃liu酸?，邊加邊攪拌冷卻，混勻后室溫保存。

　　配置要點：嚴格遵循“酸入水"操作順序，絕對禁止將水倒入濃liu酸中，避免液體飛濺造成安全事故。

　　試劑配置核心避坑要點

　　所有試劑配置完成后，必須標注配置日期、有效期，使用前確認無渾濁、長菌、結晶析出等異常情況。

　　濃縮型商品化洗滌液稀釋時，必須嚴格按照說明書比例用去離子水稀釋，禁止用自來水或普通蒸餾水替代，避免引入雜質干擾反應。

　　凍干標準品復溶時，在冰上操作，靜置5-10分鐘后輕柔渦旋混勻，禁止劇烈吹打，避免蛋白變性;復溶后分裝為單次使用量，-20℃凍存，絕對禁止反復凍融。

　　注：以上科研產品資料供參考!

　　本生BUNSEN一直視質量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經營中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準，以過硬的質量和優(yōu)良的服務來維護和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。標準品