ELISA實驗：酶聯免疫試劑盒吸附測定原理

　　酶聯免疫吸附測定(ELISA)的原理是：利用抗原抗體的特異性結合+酶催化底物顯色，實現對目標待測物的定性或定量檢測?，具體機制結合試劑盒結構拆分說明如下：

　　原理基礎

　　ELISA試劑盒基于?固相吸附?和?酶促反應?兩個技術：

　　固相吸附?：將抗原或抗體預先固定在聚苯乙烯微孔板孔壁上，固相載體可以持續(xù)吸附蛋白質，同時保留其免疫活性。

　　特異性結合?：利用抗原和抗體可以發(fā)生特異性結合的特性，讓帶有酶標記的抗體(或抗原)與固定在固相上的對應抗原(或抗體)結合。

　　顯色放大檢測?：結合在固相上的酶可以催化底物發(fā)生顯色反應，酶催化反應會逐級放大信號，顯色的深淺和目標待測物的含量直接相關，通過酶標儀讀取吸光度即可計算待測物濃度。

　　試劑盒檢測的通用流程

　　包被?：將特異性抗體吸附到微孔板孔壁，洗滌去除未結合的抗體。

　　封閉?：加入封閉液封閉孔壁上未被吸附的空白位點，減少后續(xù)非特異性結合帶來的背景干擾，再次洗滌。

　　加樣結合?：加入待測樣本，樣本中的抗原會和固相抗體特異性結合，形成固相抗原-抗體復合物，洗滌去除未結合的雜質。本生BUNSEN Elisa試劑盒

　　加酶標抗體?：加入酶標記的特異性抗體，會和結合在固相上的抗原結合，形成「固相抗體-抗原-酶標抗體」復合物，洗滌去除游離酶標抗體。

　　顯色檢測?：加入酶對應的底物，酶催化底物水解/氧化產生有色產物，產物的量與樣本中待測抗原的量成正比，最后通過酶標儀測定吸光度(OD值)，就能計算出待測物的濃度。

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