elisa預(yù)實(shí)驗(yàn)中常用的預(yù)處理方法有哪些

　　ELISA預(yù)實(shí)驗(yàn)的預(yù)處理分為?樣本預(yù)處理?和?微孔板預(yù)處理?兩類，不同類型樣本的處理方法存在差異，具體如下，可參考：

　　一、樣本預(yù)處理

　　1. 血清樣本

　　采集后室溫放置2小時(shí)(或4℃過夜)自然凝固，隨后在2-8℃條件下以?1000×g離心20分鐘?分離血清;立即檢測(cè)則收集上清直接使用，若需保存需分裝后凍存于-20℃或-80℃，避免反復(fù)凍融。

　　重點(diǎn)注意：嚴(yán)格避免溶血，溶血會(huì)釋放過氧化物酶活性物質(zhì)引發(fā)非特異性顯色，影響結(jié)果準(zhǔn)確性。

　　2. 血漿樣本

　　采用含抗凝劑的采血管采集血液，采集后30分鐘內(nèi)，在2-8℃條件下以?1000×g離心15分鐘?，收集上清后即可使用;不立即檢測(cè)則分裝凍存，同樣避免反復(fù)凍融。

　　重點(diǎn)注意：不同試劑盒對(duì)抗凝劑有特殊要求，處理前需仔細(xì)閱讀試劑盒說明書。

　　3. 細(xì)胞相關(guān)樣本

　　細(xì)胞培養(yǎng)上清：?1500 rpm離心10分鐘(4℃)?去除細(xì)胞碎片，收集上清后即可檢測(cè)，凍存保存需分裝避免反復(fù)凍融。

　　細(xì)胞裂解液：用預(yù)冷PBS洗滌細(xì)胞3次，重懸后反復(fù)凍融裂解細(xì)胞，再在2-8℃條件下以?1500×g離心10分鐘?，收集上清即可。

　　4. 組織勻漿樣本

　　用預(yù)冷PBS沖洗去除表面殘留血液，稱重后剪碎組織，按?1:9的重量體積比?(1g組織對(duì)應(yīng)9mL預(yù)冷PBS)加入液體，冰浴下充分勻漿;可進(jìn)一步超聲破碎或反復(fù)凍融裂解細(xì)胞，隨后在2-8℃條件下以?5000×g離心5分鐘?，收集上清備用，全程冰上操作減少蛋白降解。

　　5. 其他常見樣本

　　尿液/腦脊液：無(wú)菌容器收集后，?1000×g離心15分鐘(2-8℃)?去除雜質(zhì)，取上清即可檢測(cè)。

　　糞便：用PBS重懸后冰上振蕩15分鐘，?5000×g離心5分鐘?取上清即可。

　　6. 高濃度樣本特殊預(yù)處理

　　若預(yù)估樣本濃度較高，預(yù)實(shí)驗(yàn)需做梯度稀釋處理：

　　稀釋原則：將濃度降至試劑盒線性檢測(cè)范圍，推薦用含1% BSA的PBS緩沖液作為稀釋液減少基質(zhì)干擾。

　　梯度設(shè)計(jì)：低濃度樣本做1:2、1:5、1:10梯度;高濃度樣本做1:10、1:50、1:200大跨度梯度，確定OD值落在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性區(qū)的最佳稀釋倍數(shù)。

　　二、預(yù)實(shí)驗(yàn)微孔板預(yù)處理

　　目前ELISA試劑盒多已預(yù)先包被抗體，若自行包被(預(yù)實(shí)驗(yàn)摸包被條件)，常規(guī)處理流程為：

　　將包被抗體用包被緩沖液稀釋至工作濃度，每孔加入200μL，37℃孵育4小時(shí);

　　用洗滌緩沖液洗板4次，拍干后即可進(jìn)行后續(xù)加樣步驟，該流程適用于大多數(shù)TAS-ELISA、DAS-ELISA預(yù)實(shí)驗(yàn)體系。

　　注：以上科研產(chǎn)品資料供參考，具體可咨詢技術(shù)老師!

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