植物Elisa試劑盒操作流程，減少了實驗操作的復(fù)雜性

　　植物ELISA試劑盒的標準化操作流程確實能有效減少實驗操作的復(fù)雜性?，同時降低人為誤差，提升檢測結(jié)果的重復(fù)性與可靠性，本生BUNSEN整理標準化流程如下，可參考：

　　一、樣本制備(按樣本類型標準化處理)

　　葉片樣本?

　　優(yōu)先取感病病變組織，無癥狀組織也可檢測;檢測時按?1:10比例?用GEB提取液研磨稀釋，例：0.3g組織加3mL GEB提取液，也可先單獨研磨出汁液，再按100μL汁液加1mL GEB稀釋。

　　種子樣本?

　　每個亞樣本取100粒種子，充分研磨破碎后按?1:10比例?加GEB提取液，混勻后室溫靜置30分鐘，取上清作為檢測樣本。

　　特殊樣本?

　　除植物組織外，還可檢測菌絲懸液、水樣、土壤樣本，如需對應(yīng)protocol可聯(lián)系試劑盒廠商獲取。

　　二、實驗前準備

　　提前將本生試劑盒所有試劑、待檢測樣本從2-8℃取出，室溫平衡30-60分鐘，避免溫度差影響反應(yīng)活性。

　　按說明書比例稀釋濃縮洗滌液(通常為1×PBST)備用。

　　三、加樣與孵育

　　倒出預(yù)包被好抗體的本生的酶標板孔內(nèi)液體，用1×PBST洗滌3次，用無絨紙巾拍干孔內(nèi)殘留液體;若要提升檢測靈敏度，可提前加1×PBST浸泡微孔4分鐘后再瀝干。

　　依次在對應(yīng)孔位加入100μL處理好的樣本，設(shè)置空白對照、陰性對照、陽性對照孔，蓋上封板膜后37℃孵育(若采用過夜孵育則需4℃)。

　　四、洗滌與加酶

　　孵育結(jié)束后棄去孔內(nèi)液體，重復(fù)洗滌3-5次(手工洗板每孔加液≥300μL，靜置30秒再抽吸，每次拍干更換干凈吸水紙)，最后拍干酶標板。

　　按要求加入酶標二抗，再次封板后37℃孵育對應(yīng)時間，孵育完成后重復(fù)洗滌步驟。

　　五、顯色與讀數(shù)

　　每孔加入現(xiàn)配的TMB底物溶液，37℃避光顯色5-30分鐘，肉眼可見明顯顏色梯度即可終止。

　　加入終止液終止反應(yīng)，15分鐘內(nèi)用酶標儀測定對應(yīng)波長的吸光度(OD值)。

　　六、結(jié)果計算

　　以標準品濃度為橫坐標、OD值為縱坐標繪制標準曲線(推薦4參數(shù)邏輯擬合)，將樣本OD值代入曲線計算濃度后，乘以樣本稀釋倍數(shù)即為最終檢測濃度。

　　標準化流程將每一步的樣本比例、操作時間、洗滌次數(shù)都做了明確要求，實驗人員只需要按步驟執(zhí)行，大幅降低了操作復(fù)雜度和人為誤差。

　　注：以上科研產(chǎn)品資料僅供參考!

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