小鼠ELISA試劑盒操作步驟及實驗提醒

　　小鼠ELISA試劑盒操作步驟：

　　1. 標準品的加樣：設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;。

　　2. 加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

　　3. 加酶：每孔加入酶標試劑100μl，空白孔除外。

　　4. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。

　　5. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。

　　6. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

　　7. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

　　8. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

　　9. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

　　實驗提醒：

　　1、混合蛋白溶液時，避免起泡。

　　2、加校準品與樣本時，每個校準品濃度和樣本都要更換移液槍頭，公共組分應(yīng)該懸臂加樣，避免交叉污染。

　　3、合適的溫育時間，和充分的洗滌步驟，是保證實驗結(jié)果準確性的必要條件。

　　4、底物溶液為無色液體，保存過程中變?yōu)樗{色，代表底物溶液已經(jīng)失效，不得使用。

　　5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致，加入終止液后，藍色底物產(chǎn)物，會瞬間變?yōu)辄S色。

　　6、實驗中，用剩的板條，應(yīng)立即放回自封袋中，密封(低溫干燥)保存。

　　7、所有液體組分，使用前充分搖勻，嚴格按照說明書標明的時間、加樣量及加樣順序進行溫育操作。

　　8、檢測必須符合實驗室管理規(guī)范的規(guī)定，嚴格防止交叉污染，所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按照傳染物進行處置。

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