4Cell® NutriVero™Flex 10 培養(yǎng)基系統(tǒng)優(yōu)勢

本產(chǎn)品為化學成分限定的無血清、無動物源成分培養(yǎng)基,其是由賽多利斯與致力于轉(zhuǎn)化疫苗學的研發(fā)機構(gòu)Intravacc聯(lián)合開

發(fā),其將為您提供一致的細胞培養(yǎng)結(jié)果,并幫助您對病毒生產(chǎn)工藝進行更大限度的控制:

■ 生產(chǎn)效率:化學限定的高速細胞生長和高病毒滴度

■ 操作效率:簡化下游純化和過濾工藝，同時提高病毒生產(chǎn)能力

■ 安全且滿足監(jiān)管要求:降低工藝差異和污染風險，以達到最佳安全性

4Cell® NutriVero™Flex 10 培養(yǎng)基系統(tǒng)產(chǎn)品信息

新開發(fā)的4Cell® NutriVero™Flex 10是一種化學成分限定的無血清、無動物源成分培養(yǎng)基,主要用于支持Vero細胞在2D貼壁培養(yǎng)和3D微載體懸浮培養(yǎng)系統(tǒng)中的生長，并針對病毒的生產(chǎn)進行了優(yōu)化。

化學成分限定的4Cell® NutriVero™Flex 10是-一種穩(wěn)定的培養(yǎng)基,只含重組成分,不含任何植物提取物(水解物),因此其可以提供一致的細胞培養(yǎng)結(jié)果。

應(yīng)用

Vero細胞系是日本的Yasumura和Kawakita在1962年從非洲綠猴的腎臟中分離出來的,可用于不同用途，其中最重要的一個用途就是基于細胞培養(yǎng)生產(chǎn)病毒疫苗。Vero細胞系因其病毒產(chǎn)量高且穩(wěn)定而得到廣泛使用,并且相對來說易于馴化,以在生物反應(yīng)器中的微載體上生長，這樣就可以獲得更高的疫苗純度和數(shù)量。

標準產(chǎn)品特征

針對在貼壁2D單層細胞(圖1A)和3D微載體微珠(圖1B)Vero細胞生長驗證4CellONutriVero"Flex 10培養(yǎng)基的性能。在兩個系統(tǒng)中，4Cell@NutriVero"Flex 10培養(yǎng)基顯示與含有未限定提取物(水解物)的對照培養(yǎng)基性能相當。

圖1A.4Cell®NutriVero™Flex 10在Vero Cell 2D培養(yǎng)系統(tǒng)中的性能。

將Vero細胞以40000個細胞/cm2的細胞密度接種在T25搖瓶中，并在37°C、潮濕環(huán)境和5%CO2的條件下于4Cell®nutrio Vero™Flex 10培養(yǎng)基或參比對照基培養(yǎng)。

圖1B.3D培養(yǎng)系統(tǒng)中的Vero細胞生長密度

使用化學成分限定的4Cell® NutriVero™ Flex 10培養(yǎng)基和非化學限定對照培養(yǎng)基將兩個并列的生物反應(yīng)器填充到2L的工作體積攪拌速度設(shè)定在70-130rpm之間，溫度設(shè)定為37°C，pH值控制在7.2。在生物反應(yīng)器中接種 0.15 x 109 個細胞/L的細胞以及3g/L的微載體。

通過計算TCID50（50%組織培養(yǎng)感染劑量）指數(shù)進行病毒定量。與含有未限定提取物（水解物）的對照培養(yǎng)基相比，4Cell®NutriVero™Flex 10培養(yǎng)基在支持2D單層細胞中Vero感染和病毒生產(chǎn)力（圖2A）以及在微載體珠粒中懸浮（圖2B）方面顯示出較高的性能。

圖2A.對限定的4Cell®NutriVero™Flex 10培養(yǎng)基病毒生產(chǎn)能力進行初步評估。

將Vero細胞培養(yǎng)物以30000個細胞/cm2的細胞密度接種在6孔板上，而且該培養(yǎng)物感染了各種病毒：麻疹、薩賓脊髓灰質(zhì)炎1型病毒和 EV71-C4。7天后，培養(yǎng)物顯示CPE陽性，收集了上清液被并通過病毒滴定程序?qū)Ω腥绢w粒的數(shù)量進行了分析。

圖2B.3D微載體培養(yǎng)系統(tǒng)中的腸道病毒71-C4的病毒生產(chǎn)

在1L生物反應(yīng)器中將Vero細胞以0.12 ± 0.03 x 106個細胞/ml 的濃度培養(yǎng)3天，濃度達到0.9 ± 0.2 x 106 個細胞/ml。接種66小時后，以7.55log10TCID50/ml的滴度感染EV71-C4細胞。感染后在規(guī)定的時間點取樣，并分析病毒滴度。