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使用離心超濾管的這個(gè)問題，你都遇到過嗎？
由于離心超濾管使用不恰當(dāng)或是超濾知識(shí)缺乏引起的問題，簡(jiǎn)直成了實(shí)驗(yàn)汪們蛋白實(shí)驗(yàn)不成功、效率低下的常見原因之一。
為什么我截留分子量選擇沒錯(cuò)，蛋白有時(shí)候卻會(huì)漏出在濾出液中？
導(dǎo)致漏蛋白甚至檢測(cè)不到蛋白的原因很復(fù)雜，應(yīng)優(yōu)先根據(jù)樣品調(diào)整工藝，因?yàn)橥环N膜、截留分子量和裝置組合對(duì)于不同的蛋白質(zhì)類別甚至物種而言可能并非理想選擇。
在選擇離心超濾管的過程中，應(yīng)首先執(zhí)行以下步驟：
1、考慮樣品和分子特性：比如改變pH可能增加構(gòu)象改變的風(fēng)險(xiǎn)，而降低溫度可能降低濃縮效率等。
2、選擇正確的膜：超濾沒有太多的膜選項(xiàng)，但您應(yīng)對(duì)再生纖維素（RC）、Hydrosart®和聚醚砜（PES）材料進(jìn)行測(cè)試，以確定哪種材料可為您的特定材料提供低的非特異性結(jié)合和回收率。
3、選擇合適的截留分子量，通常是靶標(biāo)1/3大小的截留分子量適合。但有時(shí)則需要更小的孔徑來滿足回收率的要求。如果在病毒和核酸樣品，可參看下面截留分子量和病毒顆粒分子大小以及核酸大小的換算表。
4、選擇合適的裝置：賽多利斯擁有適用于低濃度樣品、DNA、蛋白質(zhì)、病毒、過濾應(yīng)用等廣泛的裝置選項(xiàng)；選擇合適的裝置可以有效改善結(jié)果。
5、使用合適的裝置處理方法：例如預(yù)沖洗以去除分析物或用非干擾蛋白沖洗以鈍化結(jié)合位點(diǎn)并減少損失。
6、考慮樣品控制方法，例如使用離心超濾管內(nèi)的“死體積”移走所有截留物，或預(yù)灌裝濾液管以控制截留物的體積。
