離心超濾管的使用注意事項和應(yīng)用范圍介紹
離心超濾管備有四種材質(zhì)的超濾膜:聚醚砜、三醋酸纖維素、再生纖維素,可根據(jù)不同要求靈活選用。
兩種回收濃縮液的方法:既可用吸管直接吸取并回收,又可將離心管放入離心機反甩,將濃縮液甩入回收帽中,加蓋保存,這兩種方法都可使?jié)饪s液達到近乎*回收,具有極低的蛋白吸附特性,高流速、高通量,是免疫球蛋白濃縮和脫鹽的理想用膜。
使用注意事項:選擇合適的超濾管。通常應(yīng)截留分子量不應(yīng)大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管,若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管,認(rèn)真閱讀使用說明書,注意超濾膜對各種化學(xué)物質(zhì)的耐受程度有所不同。
注意轉(zhuǎn)速和加速度不可太快,否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾,不同離心機的轉(zhuǎn)速 rpm換算成g之后,有所不同。離心機的加速度調(diào)至低檔,減小對膜的壓力,要等離心機達到目的轉(zhuǎn)速之后,方可離開離心機。膜與轉(zhuǎn)軸的方向根據(jù)說明書調(diào)整,在實際使用中,一般轉(zhuǎn)速開的比說明書里的要低,這樣可以延長離心管的使用壽命。
離心超濾管離心過程中注意是否發(fā)生蛋白沉淀,導(dǎo)致堵管。若發(fā)生沉淀,要確定沉淀的具體原因,是蛋白濃度過高還是不合適;前者可用多根超濾管同時超濾,降低濃度的辦法解決,后者的方法是換不同的緩沖溶液,直到蛋白不發(fā)生沉淀為止。
應(yīng)用范圍:
1、生物樣品濃縮:包括抗原、抗體、酶、核酸或微生物。
2、對組織培養(yǎng)提取物或細(xì)胞裂解液中大分子組分的純化。
3、對稀釋或從柱洗脫液預(yù)先純化的蛋白質(zhì)進行濃縮。
4、脫鹽和緩沖液更換。
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