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支原體試劑盒的操作關(guān)鍵和注意事項
支原體試劑盒可用于各種生物材料(如細胞培養(yǎng)物、實驗動物分泌物、動物血清等)支原體感染的檢測，應(yīng)用聚合酶鏈式反應(yīng)技術(shù)(PCR)對支原體基因保守區(qū)域的特異性片段進行擴增檢測。
該方法可以在數(shù)小時內(nèi)得到結(jié)果，與傳統(tǒng)的選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)檢測方法相比較，本方法更快速，靈敏度和特異性更高，不會出現(xiàn)由于培養(yǎng)法檢測時大量培養(yǎng)支原體而可能帶來的次級污染的問題，可用于任何類型的熒光定量PCR儀，該試劑盒可快速可靠地篩選細胞培養(yǎng)上清液，適用于科研和工藝研發(fā)，檢測程序可以在3小時內(nèi)完成。
支原體試劑盒通過擴增高度保守的操縱子，更具體的是在支原體基因組中擴增編碼區(qū)，特異性檢測支原體，檢測到支原體特異性擴增片段，該試劑盒包括引物和標(biāo)記的探針，能特異性檢測所有污染細胞和培養(yǎng)基的柔膜體物種，該引物/探針系統(tǒng)不擴增真核DNA。
試劑盒常壓滅菌操作關(guān)鍵：
(1)進鍋不擠壓：擺放待滅菌的菌種袋必須分層，每層菌種袋不行擺太擠，要留一定空地，不能彼此擠壓，不適宜將菌種袋臥疊，要分層立放，以確保蒸汽暢流。為了防止棉塞易潮濕，可在棉塞上蓋一層薄膜或油紙，但掩蓋物不行太大，否則會影響上基層蒸汽暢流。
(2)及時滅菌：隨裝隨滅。配料到滅菌間隔時間越短越好，防止雜菌自繁，大規(guī)模出產(chǎn)時，要分鍋滅菌。
(3)攻頭：指開端滅菌時要大火猛燒。從開端滅菌到溫度達100℃，歷時越短越好，不能超過2小時。
(4)控中心：常壓滅菌為了防止燒干應(yīng)留意及時向蒸發(fā)鍋內(nèi)補充水，但補水不能造成鍋內(nèi)水中止沸騰，可考慮補充沸水或微量接連補水。
注意事項：
1.工作液對人體有害，請注意防護。
2.固定液有刺激性氣味，建議在通風(fēng)櫥進行固定。
3.支原體檢測時，最好用不含抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)2～3代，這樣容易避免假陰性結(jié)果。
4.本試劑盒用于6孔板檢測時，可以進行50次檢測反應(yīng)。
5.檢測支原體污染，可以使用支原體高效細胞，這樣可以提高檢測靈敏度，即將被檢測樣品接種于細胞進行檢測。
