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一、所用培養(yǎng)基/液：LB培養(yǎng)液，TSB培養(yǎng)液，F(xiàn)T培養(yǎng)液，麥康凱培養(yǎng)基，TSC培養(yǎng)基，TSA培養(yǎng)基等。

二、 凍干保護(hù)劑：10%脫脂奶粉，5%蔗糖，1%明膠，溶于純水中。

三、 其他試劑：小牛血清，NAD，環(huán)絲氨酸等。

四、 常見(jiàn)細(xì)菌：大腸桿菌、魏氏梭菌、沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌、鴨疫里默氏桿菌、副豬嗜血桿菌等。

五、 操作步驟：

1. 所用培養(yǎng)基及凍干保護(hù)劑均高壓滅菌；

2. 取分離所得細(xì)菌菌液或甘油保存的細(xì)菌一環(huán)，在培養(yǎng)板上分區(qū)或蛇形劃板（大腸桿菌在麥康凱平板上劃板），37℃倒置培養(yǎng)過(guò)夜；

3. 取一只干凈的試管，倒入約10mL培養(yǎng)液（大腸桿菌用LB培養(yǎng)液），從培養(yǎng)過(guò)夜的平板中挑取一個(gè)單菌落于該培養(yǎng)液中，37℃振蕩培養(yǎng)過(guò)夜；

4. 取10個(gè)干凈的西林瓶，每瓶加入1mL凍干保護(hù)劑，再加入1mL培養(yǎng)過(guò)夜的菌液，蓋上橡膠塞，留出氣孔，標(biāo)記好之后放入-80℃冰箱使其冷凍；

5. 細(xì)菌凍干機(jī)預(yù)熱約30min，迅速將已冷凍的菌液放于細(xì)菌凍干機(jī)上，一般十幾小時(shí)之后細(xì)菌已凍干，關(guān)閉凍干機(jī)，取出已凍干的細(xì)菌，壓蓋，放于-80℃超低溫冰箱保存，可達(dá)十年之久。