146368-16-3|Cy3-N-羥基琥珀酰亞胺酯
花青染料熒光標(biāo)記，常被應(yīng)用于生物分子標(biāo)記，熒光成像及其他熒光生物分析。它們廣泛用于標(biāo)記多肽、蛋白質(zhì)和核酸等。Cy3 花青染料熒光標(biāo)記與蛋白質(zhì)結(jié)合熒光增強(qiáng)。標(biāo)記蛋白請選用Cy3, SE。

146368-16-3|Cy3-N-羥基琥珀酰亞胺酯

 

產(chǎn)品描述：

Cyanine3（Cy3），是花青素?zé)晒馑厝玖霞易宓某蓡T之一，是化學(xué)合成的聚甲炔染料。目前Cyanine系列染料以兩種異構(gòu)體的形式供貨，一種是非磺化花青素（non-sulfonated cyanines），一種是磺化花青素（sulfonatedcyanine）。兩者的光譜性質(zhì)幾乎*，因此大部分應(yīng)用可相互替換，比如，都可用于標(biāo)記DNA或蛋白等生物分子。兩者的主要區(qū)別在于：磺化染料是水溶性的，在水相的標(biāo)記反應(yīng)體系內(nèi)不需要使用有機(jī)共溶劑，并且降低染料在水中聚集的可能性，增強(qiáng)標(biāo)記效率。

本Cy3 NHS ester，即含N-羥基琥珀酰亞胺（N-Hydroxysuccinimide）活化基團(tuán)的Cy3，可直接與生化分子上的氨基（-NH2）反應(yīng)形成穩(wěn)定的酰胺鍵，主要是伯胺。

            

  146368-16-3|Cy3-N-羥基琥珀酰亞胺酯

 

一般特性：

外觀:	red powder
質(zhì)譜分析M+增量:	474.2
分子量:	590.15
分子式:	C34H40ClN3O4
溶解性:	soluble in organic solvents (DMF, DMSO, dichloromethane), insoluble in water
質(zhì)量控制:	NMR 1H and HPLC-MS (95%)
儲存條件:	Storage: 24 months after receival at -20°C in the dark. Transportation: at room temperature for up to 3 weeks. Avoid prolonged exposure to light. Desiccate.

 

光譜特性：

zui大激發(fā)波長, nm:	555
在zui大激發(fā)波長下的消光系數(shù), Lmol-1cm-1:	150000
zui大發(fā)生波長, nm:	570
熒光量子產(chǎn)率:	0.31

運(yùn)輸和保存方法：

冰袋運(yùn)輸。-20℃干燥避光保存，有效期1年。

注意事項

1）NHS ester基團(tuán)對濕度非常敏感，務(wù)必干燥保存產(chǎn)品。使用前產(chǎn)品需放到室溫回溫至少20min。

2）NHS ester基團(tuán)的水解發(fā)生在水溶性緩沖體系屬于競爭性反應(yīng)。對蛋白/多肽（濃度：1-1mg/ml）伯胺的連接反應(yīng)建議在pH 7-9范圍內(nèi)進(jìn)行。使用不含氨基的緩沖體系，pH 7-9。比如100 mM 磷酸鈉，150 mM 氯化鈉， pH7.5； 100mM Hepes, pH 7.5。100 mM 碳酸鈉/碳酸氫鈉, pH 8-9；或100mM硼酸緩沖液, pH 8-9。

3）不要使用含伯胺的任何緩沖液，比如Tris，甘氨酸。

4）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

 

 

使用方法：（用Cy3-NHSEster 標(biāo)記抗體）

【注意】：可參考本方法進(jìn)行多肽，蛋白或者其他分子的標(biāo)記，需要根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)體系對合適的標(biāo)記緩沖體系，樣本濃度，染料濃度等參數(shù)做出合適的調(diào)整。

1）用不含氨基的合適的緩沖液（eg.100mM磷酸鈉，150mM NaCl, pH7.5）溶解抗體使其濃度達(dá)到1-5mg/ml?！咀ⅰ浚喝缈贵w中有殘留Tris或 glycine 污染，則需透析或者脫鹽到合適的緩沖液內(nèi)。

2）使用前，用適量去離子水或者無水DMSO溶解Cy3-NHS，使其摩爾濃度為抗體摩爾濃度的400倍，例如，待標(biāo)記的IgG濃度為1mg/ml（eg 6.7μM），則溶解后Cy3-NHS的濃度為2.7mM；如待標(biāo)記的IgG濃度為2.5mg/ml，則溶解后Cy3-NHS的濃度為6.75mM；

3）向抗體中加入適量Cy3-NHS試劑，以達(dá)到預(yù)期的標(biāo)記效率?！咀ⅰ浚寒?dāng)用Cy 3 NHS ester標(biāo)記抗體或其他蛋白，亮度zui高的偶聯(lián)物其染料/蛋白的比率為4-12，取決于特定的應(yīng)用。過高比率會增加非特異性背景，喪失抗體特異性結(jié)合，導(dǎo)致聚集。建議根據(jù)應(yīng)用優(yōu)化標(biāo)記比率。

4）室溫孵育60min（或更長）；

5）利用合適緩沖液透析或脫鹽柱去除未反應(yīng)的試劑；

6）分別在280nm和550nm檢測Cy3-抗體的吸光值；

7）測定Cy3標(biāo)記效率（DOL）和標(biāo)記濃度。見下公式。

公式一. 利用下面公式計算Cy3標(biāo)記效率（DOL）及其濃度（mg/ml）

E.1  Number of Cy3 dye per protein=molarity Cy3  dye / molarity protein

E.2  [Molarity of Cy3 dye]=A555/ε555

E.3  [Molarity of protein]=A280C/ε280

E.4  mg/ml=[A280-(A555×0.08)/(E1%/10)]×dilution  factor

【注】上述參數(shù)如下： A555=conjugate  absorbance at 555±2nm ε555=molarextinction  coefficient Cys dye =150000M-1cm-1 A280=  conjugate absorbance at 280nm A280C  =corrected conjugate absorbance at 280nm= A280-( A555×0.08) ε280= molarextinction  coefficient protein(M-1cm-1)=MWp×E1%/10

 

其它染料列表：

N-羥基琥珀酰亞胺脂Dye NHS esters

Pyrenebutyric acid NHS ester

ROX NHS ester, pure 6- isomer

BDP FL NHS ester

FAM NHS ester

Cyanine3 NHS ester

Cyanine3.5 NHS ester

Cyanine5 NHS ester

Cyanine5.5 NHS ester

Cyanine7 NHS ester

Cyanine7.5 NHS ester

Sulfo-Cyanine3 NHS ester

Sulfo-Cyanine5 NHS ester

sulfo-Cyanine5 bis-NHS ester

Sulfo-Cyanine7 NHS ester

馬來酰亞胺 Dye maleimides

Pyrene maleimide

BDP FL maleimide

Cyanine3 maleimide

Cyanine5 maleimide

Cyanine5.5 maleimide

Cyanine7 maleimide

Cyanine7.5 maleimide

Sulfo-Cyanine3 maleimide

Sulfo-Cyanine5 maleimide

伯胺 Primary amine

BDP FL amine

Cyanine3 amine

Cyanine5 amine

Cyanine5.5 amine

Cyanine7 amine

Cyanine7.5 amine

Sulfo-Cyanine5 amine

Sulfo-Cyanine7 amine

酰肼 Dye hydrazides

Pyrene hydrazide

BDP FL hydrazide

Cyanine3 hydrazide

Cyanine5 Boc-hydrazide

Cyanine5 hydrazide

Cyanine5.5 hydrazide

Cyanine7 hydrazide

Cyanine7.5 hydrazide

馬來酰亞胺 Dye maleimides

BDP FL maleimide

Cyanine3 maleimide

Cyanine5 maleimide

Cyanine5.5 maleimide

Cyanine7 maleimide

Cyanine7.5 maleimide

Sulfo-Cyanine3 maleimide

Sulfo-Cyanine5 maleimide

羧酸 Carboxylic acids

Pyrenebutyric acid

BDP FL carboxylic acid

Cyanine3 carboxylic acid

Cyanine3.5 carboxylic acid

Cyanine5 carboxylic acid

Cyanine5.5 carboxylic acid

Cyanine7 carboxylic acid

Cyanine7.5 carboxylic acid

Sulfo-Cyanine3 carboxylic acid

Sulfo-Cyanine5 carboxylic acid

Sulfo-Cyanine7 carboxylic acid

點(diǎn)擊化學(xué)試劑

非熒光炔烴 Non-fluorescent alkynes

Pentynoic acid STP ester

Biotin alkyne

非熒光疊氮化物 Non-fluorescent azides

Azidobutyric acid NHS ester

Biotin azide

寡核苷酸分析

亞磷酰胺 Phosphoramidites

FAM Phosphoramidite, 6-Isomer

Alkyne Amidite, hydroxyprolinol

Alkyne Phosphoramidite, 5'-terminal

DMS(O)MT aminolink C6

Long trebler phosphoramidite

Pyrene phosphoramidite dU

PCR/PCR PCR/PCR

ROX reference dye for PCR

SYBR Green I Gel Staining Solution, 10000x

SYBR Green I for Real Time PCR, 100x

CPG固相修飾 CPG solid supports

Alkyne CPG modifier 500

TFA-Amino modifier CPG 500

三磷酸酯修飾 Modified triphosphates

Ami1-ddUTP

Ami1-dUTP