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DBCO-Polyethylene Glycol-Maleimidel活細(xì)胞標(biāo)記：原理與應(yīng)用指南
發(fā)布時(shí)間：2025-12-3| 提 供 商 | 西安凱新生物科技有限公司 | 資料大小 | 90.6KB |
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| 資料類型 | PNG 圖片 | ||
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【試劑描述】
DBCO-PEG-Mal 是一種異質(zhì)雙功能PEG交聯(lián)劑，其兩端分別帶有能發(fā)生生物正交反應(yīng)和經(jīng)典巰基偶聯(lián)的官能團(tuán)。
（1）DBCO端： 一種環(huán)辛炔衍生物，能通過無銅點(diǎn)擊化學(xué)與疊氮基團(tuán)高效、快速、特異性地反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑鍵。該反應(yīng)無需有毒的銅催化劑，非常適合活細(xì)胞標(biāo)記和體內(nèi)應(yīng)用。
（2）Mal端： 馬來酰亞胺基團(tuán)，能在中性pH條件下，特異性地與巰基反應(yīng)，形成穩(wěn)定的硫醚鍵。這是修飾蛋白質(zhì)、多肽上半胱氨酸殘基的經(jīng)典方法。
（3）PEG間隔臂： 連接兩個(gè)反應(yīng)端，提供水溶性、生物相容性，并減少空間位阻。
簡(jiǎn)單來說，它是一個(gè)“橋梁"，能同時(shí)連接一個(gè)帶疊氮基的分子和一個(gè)帶巰基的分子。
【試劑信息】
英文名稱：DBCO-PEG-Mal；DBCO-Polyethylene Glycol-Maleimide
英文別名：DBCO-Polyethylene Glycol-Mal；DBCO-PEG-Maleimide
中文名稱：二苯基環(huán)辛炔聚乙二醇馬來酰亞胺，二苯基環(huán)辛炔 PEG 馬來酰亞胺
分子量：1000，2000，3400，5000，10000，20000（可按需定制）
外觀：固體/粉末
規(guī)格：1g，5g，10g等
儲(chǔ)存條件：-20℃，干燥，避免頻繁解凍和冷凍
溶解性：溶于大部分有機(jī)溶劑，溶于水
運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
純度：95%+
供應(yīng)商：西安凱新生物科技有限公司
結(jié)構(gòu)式：
安全性：
操作時(shí)需佩戴防護(hù)裝備，避免接觸皮膚和眼睛。
如不慎接觸，請(qǐng)立即用大量清水沖洗，并尋求醫(yī)療幫助。
該試劑只用于科研
活細(xì)胞標(biāo)步驟【溫馨提示：僅供參考】
（1）：細(xì)胞表面疊氮基團(tuán)的代謝標(biāo)記
細(xì)胞培養(yǎng)： 在培養(yǎng)皿或孔板中培養(yǎng)細(xì)胞至50-70%匯合度。
配制工作液： 將Ac4ManNAz溶解于DMSO中，配制成高濃度儲(chǔ)備液。用培養(yǎng)基將其稀釋至工作濃度（通常為50-100 μM）。
孵育標(biāo)記： 移除舊培養(yǎng)基，加入含Ac4ManNAz的新鮮培養(yǎng)基。
孵育： 在細(xì)胞培養(yǎng)箱中（37°C, 5% CO?）孵育 24-72 小時(shí)，讓細(xì)胞有足夠時(shí)間將疊氮糖整合到表面糖蛋白上。
洗滌： 孵育結(jié)束后，用預(yù)熱的PBS輕柔洗滌細(xì)胞2-3次，去除未參與的疊氮糖。
第二步：DBCO-PEG-Mal與細(xì)胞表面疊氮基團(tuán)的點(diǎn)擊反應(yīng)
配制DBCO-PEG-Mal工作液： 將DBCO-PEG-Mal溶解于無水DMSO中，配制成高濃度儲(chǔ)備液（如10 mM）。用預(yù)熱的無血清培養(yǎng)基或PBS將其稀釋至工作濃度（通常為10-100 μM）?，F(xiàn)用現(xiàn)配。
孵育： 移除PBS，向細(xì)胞中加入DBCO-PEG-Mal工作液。
點(diǎn)擊反應(yīng)： 在細(xì)胞培養(yǎng)箱中避光孵育30-90分鐘。DBCO與疊氮的反應(yīng)快速且高效。
洗滌： 反應(yīng)結(jié)束后，用預(yù)熱的PBS洗滌細(xì)胞2-3次，去除未反應(yīng)的DBCO-PEG-Mal。
第三步：馬來酰亞胺與巰基分子的偶聯(lián)反應(yīng)
準(zhǔn)備巰基分子： 將帶有巰基的功能分子溶解在適當(dāng)?shù)木彌_液（如無血清培養(yǎng)基或PBS，pH 6.5-7.5）中。確保緩沖液中不含其他含巰基的還原劑。
孵育： 向經(jīng)過第二步處理的細(xì)胞中加入巰基分子工作液。
Mal-巰基反應(yīng)： 在細(xì)胞培養(yǎng)箱中避光孵育30-60分鐘。
最終洗滌： 用預(yù)熱的PBS洗滌細(xì)胞2-3次，去除未反應(yīng)的巰基分子。
第四步：分析與檢測(cè)
根據(jù)所連接的功能分子進(jìn)行后續(xù)檢測(cè)：
如果是熒光染料，可立即進(jìn)行活細(xì)胞熒光成像或流式細(xì)胞術(shù)分析。
如果是生物素，可加入熒光標(biāo)記的鏈霉親和素進(jìn)行檢測(cè)。
如果是多肽或蛋白質(zhì)，可進(jìn)行相應(yīng)的功能實(shí)驗(yàn)或檢測(cè)。
【更多試劑】
PCl-PEOz-COOH
mPEG-DF / mPEG-DF
PLGA-Hyd-PEG-NHS
PLGA-Hyd-PEG-COOH
mPEG-LA / mPEG-LA
PLGA-PEG-Fluorescein
PLGA-Amine PLGA-Amine
PAsp-PEG-SH/HS-PEG-PAsp
mPEG-Cysteine / mPEG-Cysteine
NPC-PEG-NPC / NPC-PEG-NPC
mPEG-Folate / mPEG-Folate
以上內(nèi)容均由西安凱新生物科技有限公司YNN編輯整理
該試劑僅用于科研實(shí)驗(yàn)，不可用于人體