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如何用水溶性Cy5 NHS ester標(biāo)記蛋白多肽
發(fā)布時(shí)間：2021-12-1| 提 供 商 | 西安凱新生物科技有限公司 | 資料大小 | 29.2KB |
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| 資料圖片 | 下載次數(shù) | 15次 | |
| 資料類型 | JPG 圖片 | ||
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如何用水溶性Cy5 NHS ester標(biāo)記蛋白多肽？下面介紹一種水溶性Cy5 NHS ester標(biāo)記 (D-ser2)-leucineenkephalin實(shí)驗(yàn)操作步驟。
1. Cy5 NHS 1.0 mg溶解于400 μL DMSO后，加入到1mL 的玻璃瓶中盛有(D-ser2)-leucine- enkephalinacetate (YSGFLT，0.75 mg) 的400 μL DMSO溶液。（Dye 和peptide 投料比是 1:1）
2. 然后加入15 μL三乙胺，常溫避光攪拌反應(yīng)混合物過夜。
3. 用HPLC 純化蛋白，使用蛋白C18柱子(25 cm×10 mm)，每次上樣注入2×400 μL，30分鐘梯度洗脫。從0.1% TFA水溶液到MeCN∶H2O（0.1% TFA）=70∶30，流速4mL /min。（對不同的蛋白選擇不同的合適HPLC梯度流動(dòng)相）
4. 收集適當(dāng)?shù)纳珟Х?，?biāo)記多肽的保留時(shí)間比未標(biāo)記的多肽長。
5. 產(chǎn)品冷凍干燥成粉末或在水溶液中，-20℃避光儲存；必要時(shí)可用質(zhì)譜表征。
6. CyDye標(biāo)記的蛋白穩(wěn)定性取決于蛋白本身。例如標(biāo)記的IgG在4 ℃可避光保存2月；更長期的保存需加入等體積的甘油-20 ℃避光保存。
供應(yīng)商：西安凱新生物科技有限公司
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