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一種功能化交聯(lián)劑SMCC（64987-85-5）偶連蛋白和多肽

 

    蛋白質交聯(lián)劑是一類小分子化合物，具有2個或者更多的針對特殊基團（-NH2、-COOH、-HS等）的反應性末端，可以和2個或者更多的分子分別偶聯(lián)，從而使這些分子結合在一起，zui終形成共軛蛋白。

供應商：西安凱新生物科技有限公司

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產品名稱：SMCC

簡介：SMCC crosslinker (Succinimidyl-4-[N-maleimidomethyl]cyclohexane-1-carboxylate) is a heterobi-functional protein crosslinker with a maleimide group that is sulfhydryl (thiol; -SH) reactive and a NHS ester group that is amine reactive. The SMCC crosslinking reagent is permeable across the lipid bilayer of the cell membrane. The 9 atom spacer arm of SMCC is not cleavable.

Molecular Weight: 334.3

CAS #: 64987-85-5

Spacer Length: 8.3 Å

Alternative Names: 4-(N-Maleimidomethyl)cyclohexanecarboxylic acid N-hydroxysuccinimide ester;

 

    SMCC是一類含有N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活性酯和馬來酰亞胺的雙功能偶聯(lián)劑.可以將分別含有巰基和氨基的化合物鍵接在一起。該交聯(lián)試劑可滲透到細胞膜的脂質雙層中，NHS活性酯與伯胺在PH7-9的環(huán)境形成酰胺鍵。馬來酰胺與巰基在PH6.5-7.5的環(huán)境下形成穩(wěn)定的硫醚鍵。在水溶液中，NHS活性酯的水解是（與氨基的反應）個競爭反應。馬來酰胺比NHS穩(wěn)定，但是在PH大于7.5時，馬來酰胺會慢慢水解，失去與巰基反應的特異性。因而，在使用SMCC時通常是在PH7.2-7.5的環(huán)境下進行，并且先讓NHS發(fā)生反應。SMCC結構里的環(huán)己烷環(huán)可以降低馬來酰胺的水解速率。這使得蛋白質在用SMCC修飾之后可以凍干存放一段時間。很多蛋白質都選用該試劑來進行馬來酰亞胺修飾。

     KLH (Keyhole Limpet Hemocyanin)，即血藍蛋白，是在某些軟體動物、節(jié)肢動物(蜘蛛和甲殼蟲)的血淋巴中發(fā)現(xiàn)的一種游離的藍色呼吸色素。血藍蛋白含兩個直接連接多肽鏈的銅離子，與含鐵的血紅蛋白類似，它易于氧結合，也易與氧解離，是已知的惟一可與氧可逆結合的銅蛋白，氧化時呈青綠色，還原時呈白色。其分子量45０ ０00～１30 000。由于KLH比BSA有更高的免疫原性，因而是zui常被選用的載體蛋白。  

    用SMCC來制備抗體-酶或者半抗原作載體的蛋白質，經常采用兩步合成法。首先，含有氨基的蛋白質與幾倍的偶聯(lián)劑反應，反應結束后通過脫鹽柱或者透析的方法除掉沒有反應完的SMCC。然后，再與含有巰基的蛋白質反應。在實際操作中要注意的是，SMCC怕潮濕，存放時要和干燥劑一起存放。并且使用中從冰箱拿出來時要先在室外放置一段時間平衡溫度，以免立刻開啟，空氣中水分遇冷凝結，破壞SMCC 結構。

 

• 將 20 mg SMCC（這是聯(lián)接40條多肽的量）溶于2 ml DMF。
• 將0.8 ml KLH加入到25 ml圓底燒瓶中，補加1×PBS(pH 7.2)使蛋白終濃度為 15 mg/ml。
• 將溶解好的SMCC溶液緩慢滴加到120 mg KLH 蛋白體系中，室溫攪拌反應1h。
• 用1 L 1×PBS (PH 7.4) 溶液于4℃下透析 6 小時，除去游離的SMCC。
• 將透析后的KLH蛋白倒入50 ml離心管中，通過離心管的刻度確定其體積，根據(jù)反應前加入的KLH蛋白的量來計算透析后蛋白的濃度，然后根據(jù)其濃度將2.5 mg KLH-SMCC溶液轉移到5 ml離心管中。
  例如：反應前加入KLH蛋白的量為120 mg，透析后的KLH蛋白體積為20 ml，那么透析后的KLH蛋白濃                                                      μl KLH-SMCC溶液轉移到5 ml離心管中。
• 將 3.0 mg 多肽用 0.6 ml 1×PBS (pH 7.2) 溶液溶解。
  注意：這里多稱量出0.5 mg多肽是用來做ELISA檢測的，取出100 μl即可。檢測多肽隨交聯(lián)好的抗原一起寄出，濃度為5 mg/ml。
• 用Ellman試劑檢測多肽中的巰基：在96孔板中加入100 μl Ellman試劑儲備液，再加入10μl多肽溶液，用Nano分光光度計在λ=412 nm下測其紫外吸收值，如果OD值>0.15做 下一步；OD值<0.15并>0.05補加多肽，直至達到要求；OD值<0.05返回多肽合成步驟重新質控。
  Ellman試劑是用來檢測游離巰基的，如果檢測液顯黃色說明多肽的Cys的巰基大部分以游離態(tài)存在；如果檢測液不顯黃色則說明多肽Cys中的巰基已經被氧化形成二聚體或多聚體。
• 將多肽液滴加到KLH-SMCC管中，室溫下用垂直混勻器混勻反應4小時。
• 用Ellman試劑檢測多肽中的巰基：在96孔板中加入100 μl Ellman試劑儲備液，再加入10 μl 教練后的多肽溶液，用Nano分光光度計在λ=412 nm下測定紫外吸收值。OD值<0.03說明多肽和KLH蛋白交聯(lián)率已達到80%以上；OD值>0.03則再補加SMCC活化好的KLH蛋白繼續(xù)交聯(lián)。如果Ellman試劑顯黃色說明多肽與KLH蛋白偶聯(lián)不*；如果Ellman試劑不顯黃色則說明多肽已經全部與KLH蛋白偶聯(lián)。

 

【交聯(lián)劑的應用】：

細胞膜結構研究

蛋白質結構研究

蛋白質間相互作用研究

生物研究（靶向藥物）

載體蛋白與半抗原的連接

蛋白質或其他分子的固相化

抗體的標記、標記轉移

蛋白質與核酸的連接

蛋白質修飾等 

 

【選擇交聯(lián)劑應考慮的因素】：

反應特異性

反應指向性

間臂長度性

水溶性

透膜性

一種或兩種反應基團

熱反應還是光電反應

可否切斷

可否碘標

【可與交聯(lián)劑反應的基團】：

游離氨基（賴氨酸ε或N末端的氨基）

巰基（半胱氨酸）

羧基（天冬氨酸，谷氨酸，末端羧基）

羥基（絲氨酸或蘇氨酸）

酮基，醛基，糖鏈

苯酚衍生物（苯丙氨酸，色氨酸，酪氨酸）

放射性基團: R-N3 

 

西安凱新生物科技有限公司是西北一家專業(yè)經營進口生化科研試劑的公司，產品服務于納米靶向試劑、藥物傳遞系統(tǒng)、點擊化學等領域。西安凱新生物科技有限公司可以提供一系列的蛋白交聯(lián)劑，包含有同端雙功能交聯(lián)劑，異端雙功能交聯(lián)劑，氘代交聯(lián)劑，生物素交聯(lián)劑及其他種類交聯(lián)劑等等產品。我們提供的交聯(lián)劑產品zui小包裝是100毫克，價格便宜，品質較好深受廣大科研客戶歡迎。

 

產品列表：

Sulfo-NHS   CAS #: 106627-54-7

BS3         CAS #: 82436-77-9

BS2G

BSG         CAS #: 79642-50-5

DSP         CAS #: 57757-57-0

DSS         CAS #: 68528-80-3

DTSSP       CAS #: 81069-02-5

EGS         CAS #: 70539-42-3

Sulfo-EGS

DSSeb       CAS # 23024-29-5

BMPS        CAS #: 55750-62-4

EMCS        CAS #: 55750-63-5

GMBS        CAS #: 80307-12-6

LC-SPDP

MBS         CAS #: 58626-38-3

PDPH

SBA         CAS #: 42014-51-7

SIA         CAS #: 39028-27-8

SMCC        CAS #: 64987-85-5

SMPB        CAS #: 79886-55-8

SMPH

SPDP        CAS #: 68181-17-9

Sulfo-LC-SPDP

Sulfo-MBS

Sulfo-SANPAH CAS #: 102568-43-4

Sulfo-SMCC   CAS #: 92921-24-9

BS2G-d4

BS3-d4

DSG-d4

DSS-d4

DSP-d8

Biotin Hydrazide  CAS #: 66640-86-6

NHS-Biotin        CAS #: 35013-72-0

NHS-SS-Biotin     CAS #: 142439-92-7

Sulfo-NHS-Biotin  CAS #: 119616-92-5

Sulfo-NHS-LC-Biotin CAS #: 128062-22-0

Sulfo-NHS-SS-Biotin CAS #: 202057-28-1

HPG               CAS #: 24645-80-5

SATA              CAS #: 76931-93-6

Sulfo-NHS Acetate CAS #: 152305-87-8

 

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