Blood Taq DNA聚合酶（免提?。?/h3>

產(chǎn)品名稱	貨號	規(guī)格	保存	價格(元)
Blood Taq DNA聚合酶（免提?。?/span>	D1010L1179	200 tests	-20℃	550
	D1010L1180	1000 tests	-20℃	2450

產(chǎn)品描述

Blood Taq DNA聚合酶來源于攜帶有突變的Taq DNA 聚合酶基因的E. coli 菌株，是截短后的Taq DNA聚合酶，缺失了N端的 5´結(jié)構(gòu)特異性核酸內(nèi)切酶結(jié)構(gòu)域，缺失了N端的280個氨基酸；此外其基因內(nèi)部發(fā)生了三個點(diǎn)突變。這些突變使它能夠耐受全血中存在的抑制劑,  Blood Taq DNA聚合酶其他性能與常規(guī)Taq DNA聚合酶沒有較大差異。此酶能夠擴(kuò)增人和小鼠全血樣品中的DNA而無需事先提純。Blood Taq DNA聚合酶在25 µL反應(yīng)體系中能夠耐受高達(dá)20%的全血（50 µL反應(yīng)體系中耐受30%）。

Blood Taq DNA聚合酶較其他同類產(chǎn)品單位活性高，單位反應(yīng)成本低。

 

使用 Blood Taq DNA聚合酶擴(kuò)增人全血。1:5%血液+Na-EDTA；2:5%血液+K-EDTA；3:5%血液+ Na-肝素；4:5%血液+Na-檸檬酸；5:含有人干血的1mm2 FTA GutherieCard；6:含有人干血的1mm2 FTA Card（50 µL水洗）。

運(yùn)輸與保存方法

冰袋運(yùn)輸。收到貨后-20℃避光干燥保存，1年有效。

使用方法

1. 反應(yīng)體系配制。各組分在冰上*融化、混勻，按照下表進(jìn)行加樣:

組分	25 µL	50 µL	終濃度
5X Bloot Taq Reaction Buffer	5 µL	10 µL	1X
10 mM dNTP	0.5 µL	1 µL	0.2 mM
10 µM Forward Primer	0.75 µL	1.5 µL	0.3 µM (0.05-1 µM)
10 µM Reverse Primer	0.75 µL	1.5 µL	0.3 µM (0.05-1 µM)
Whole Blood	up to 2.5 µL*	up to 10 µL**
Blood Taq DNA	2 µL	4 µL
Nuclease-free H2O	to 25 µL	50 µL

* ≤10% Recommended in 25 µL reaction volume. ** ≤=20% Recommended in 50 µL reaction volume.

2. 加血液樣品。先將其它組分用移液器上下混勻，然后將血液加在管子底部。

3. 將PCR管轉(zhuǎn)移至95°C預(yù)熱的PCR儀，開始循環(huán)。

注：若反應(yīng)體系中包含>10%的血液，*用50 µL 反應(yīng)體系。

4. PCR反應(yīng)。*PCR程序：通常為30-40個循環(huán)： 

步驟	溫度	時間
Initial Denaturation	95°C	3 minutes
30-40 Cycles (Typically 35)	95°C 50-68°C 68°C	20 seconds 30 seconds 2minutes per kb
Final Extension	68°C	10 minutes
Hold	4-10°C

注意事項(xiàng)

1. DNA 模板: 全血樣品*用肝素鈉、Na-EDTA、K-EDTA或者檸檬酸鈉處理，雖然Blood Taq DNA聚合酶可以耐受30%（v/v）的全血樣品，但為了達(dá)到*擴(kuò)增效果,5%–10%為建議的理想樣品量。干血如果存放在Guthrie卡或者903卡上(Whatman, NJ)，可以直接在25µL反應(yīng)體系內(nèi)加入1mm punch disc。如果血液存放在FTA paper (Whatman, NJ), 則先把 1mm punch disc在50µL dH2O中,50°C條件下孵育5分鐘，然后棄去50µL dH2O，把disc 直接放入25或50µL PCR 反應(yīng)體系中。

2. 引物：理想引物長度在20–30個核苷酸，GC含量40–60%?？捎糜嬎銠C(jī)軟件輔助進(jìn)行引物設(shè)計，諸如PrimerSelect™(DNAStar Inc, Madison, MI)或者Primer3等軟件在引物設(shè)計和分析時均表現(xiàn)良好。每個引物在反應(yīng)體系中的終濃度為0.05–1μM, 0.3μM時表現(xiàn)更佳。

3. dNTPs: 每種dNTP*濃度為200 µM。

4. 冷敏感: Blood Taq DNA聚合酶增加了冷敏感性，包含部分熱啟動酶（Hot Start Taq）的特點(diǎn)，將反應(yīng)體系至于冰上操作，并迅速置于95°C預(yù)熱的PCR儀可以將非特異性擴(kuò)增降至zui低。 

5. 變性溫度和時間: 在正式開始PCR循環(huán)前，*行95°C，3分鐘的預(yù)變性，可以確保血細(xì)胞得到充分解離并釋放出DNA模板。 

6. 退火溫度和時間: *退火時間持續(xù)30秒到1分鐘，退火溫度可以通過梯度PCR進(jìn)行優(yōu)化。梯度PCR時，退火起始溫度低于計算出melting temperature (Tm)5°C。

       7. 延伸時間: *延伸溫度為68°C，zui后的延伸程序*為10分鐘，68°C。Blood Taq DNA聚合酶延伸速度為500bp/min.