液相色譜能夠處理成分復(fù)雜、極性差異大或穩(wěn)定性低的混合物。通過(guò)選擇合適的固定相和流動(dòng)相梯度，它可以實(shí)現(xiàn)對(duì)高沸點(diǎn)、大分子、熱不穩(wěn)定物質(zhì)(如蛋白質(zhì)、多糖、農(nóng)藥殘留)的有效分離，且無(wú)需高溫加熱，避免了物質(zhì)分解的問(wèn)題。結(jié)合了高精度進(jìn)樣系統(tǒng)和高靈敏度檢測(cè)器(如紫外檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、質(zhì)譜檢測(cè)器等)，能夠滿足痕量物質(zhì)(濃度低至μg/L甚至ng/L級(jí)別)的檢測(cè)需求。在定性分析方面，通過(guò)保留時(shí)間和特征光譜或質(zhì)譜圖的雙重驗(yàn)證，可以準(zhǔn)確識(shí)別物質(zhì)成分；在定量分析方面，采用外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法等成熟方法，能實(shí)現(xiàn)物質(zhì)濃度的準(zhǔn)確計(jì)算。
 

　　液相色譜法以液體為流動(dòng)相，由于液體流經(jīng)色譜柱時(shí)受到的阻力較大，因此需要對(duì)載液施加高壓(一般可達(dá)150～35000KPa)，以確保流動(dòng)相能夠迅速通過(guò)色譜柱。同時(shí)，流動(dòng)相在柱內(nèi)的流速也較經(jīng)典液相色譜快得多(一般可達(dá)1～10mL/min)，從而大大縮短了分析時(shí)間。已廣泛采用高靈敏度的檢測(cè)器，進(jìn)一步提高了分析的靈敏度。例如，熒光檢測(cè)器的靈敏度可達(dá)10g級(jí)別，而且用樣量小，一般只需幾個(gè)微升。
 

　　與氣相色譜法相比，液相色譜法不受試樣揮發(fā)性的限制，能夠分析高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差、相對(duì)分子量大(大于400以上)的有機(jī)物。這些物質(zhì)幾乎占有機(jī)物總數(shù)的75～80，原則上都可應(yīng)用高效液相色譜法來(lái)進(jìn)行分離和分析。通常配備有自動(dòng)化進(jìn)樣系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理軟件，使得操作過(guò)程更加簡(jiǎn)便快捷，降低了人工誤差的風(fēng)險(xiǎn)。

 

　　液相色譜的測(cè)定步驟：
 

　　1.樣品預(yù)處理
 

　　-提?。悍Q取試樣約10g(準(zhǔn)確至0.1g)于100ml錐形瓶中，加入60ml混合提取液和2g氯化鈉，振蕩30min。經(jīng)濾孔為80-120μm的過(guò)濾漏斗抽濾，殘?jiān)?×10ml混合提取液洗滌。合并濾液和洗液于250ml燒杯中。在沸水中加熱30min，取下，于3000r/min離心20min，置4℃冰箱中冷卻20min，然后經(jīng)濾孔為40～80μm的過(guò)濾漏斗抽濾，收集濾液。
 

　　-凈化：若樣品成分復(fù)雜，可采用固相萃取等方法進(jìn)一步凈化。
 

　　-濃縮定容：將提取液用氮吹儀濃縮至近干，用甲醇定容至適當(dāng)體積，過(guò)0.22μm微孔濾膜后待測(cè)。
 

　　2.儀器準(zhǔn)備
 

　　-流動(dòng)相配制：選擇HPLC級(jí)或更高級(jí)別的溶劑，按比例配制流動(dòng)相，并用0.22μm濾膜過(guò)濾，使用時(shí)蓋好帶排氣孔的瓶蓋。
 

　　-色譜柱安裝：將色譜柱正確安裝在柱溫箱中，連接好管路，確保無(wú)泄漏。
 

　　-系統(tǒng)平衡：用流動(dòng)相沖洗系統(tǒng)至少30分鐘，直至基線穩(wěn)定。
 

　　3.進(jìn)樣分析
 

　　-樣品裝載：將樣品溶液注入進(jìn)樣環(huán)，注意避免氣泡產(chǎn)生。
 

　　-數(shù)據(jù)采集：?jiǎn)?dòng)色譜工作站，開(kāi)始采集數(shù)據(jù)，記錄色譜圖。
 

　　4.數(shù)據(jù)處理
 

　　-定性定量：根據(jù)保留時(shí)間定性，采用外標(biāo)法或內(nèi)標(biāo)法定量。
 

　　-結(jié)果報(bào)告：計(jì)算樣品中目標(biāo)化合物的含量，并出具檢測(cè)報(bào)告。