酶特征

•  克隆有 Thermu aquaticus DNA Polymerase 基因的大腸桿菌經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)后，經(jīng)過(guò)化學(xué)修飾，再經(jīng)三次過(guò)柱純化分離出來(lái)的重組蛋白。

•  在常溫下沒(méi)有聚合酶的活性，需經(jīng)過(guò) 95 ℃ 4mins 的高溫造成化學(xué)修飾基團(tuán)的脫落，然后才有聚合的活性；這樣就避免在低溫階段的非特異性擴(kuò)增；大大提高了 PCR 反應(yīng)的靈敏度和特異性。隨著 PCR 擴(kuò)增的進(jìn)行，酶活性會(huì)被逐步釋放，這樣就有效提高擴(kuò)增效率及產(chǎn)物量。

•  具有 5' 到 3 ‘合成 DNA 的能力；無(wú) 3 '到 5 ‘外切酶的活性。

•  具有 5 ' 到 3 ‘外切酶的活性， 可用于實(shí)時(shí)熒光 PCR 。

•  具有 3 ‘端加 A 的功能，產(chǎn)物經(jīng)純化后可直接用于 T － A 克隆。

•  無(wú)外源核酸酶和細(xì)菌 DNA 污染。

•  SDS － PAGE 檢測(cè)，純度＞ 95% 。

•  延伸溫度 72 ℃ ， Mg 2+ 濃度 1.5mM  dNTPS 濃度 0.2mM , 延伸速度為 2000base/min 。

酶單位定義

在 74℃ 條件下， 30 分鐘內(nèi)催化 10nmol dNTP 的摻入反應(yīng)成為酸不溶性物質(zhì)所需的酶量為一個(gè)單位。反應(yīng)條件為： 50mM Tris-HCl (pH8.3 ， 25℃ ), 50mM NaCl, 5mM MgCl2, 200mM dNTP( 含未標(biāo)記和標(biāo)記 [3H] dTTP ), 10mg 活化的小牛胸腺 DNA 和 0.1mg/ml BSA, 終反應(yīng)體積為 50ml 。