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本應(yīng)用中作者采用了TSKgel G3000SW尺寸排阻色譜柱參照《英國藥典》和《歐洲藥典》的方法，建立測(cè)定人促紅素中二聚體和高分子量物質(zhì)含量的方法。分析結(jié)果顯示：?jiǎn)误w峰的保留時(shí)間約為30~35 min。分離度溶液中二聚體與單體峰之間的分離度均大于1.5。以信噪比S/N ≥ 3為檢測(cè)限，單體峰濃度檢測(cè)限為：0.002 mg/mL。該方法專屬性強(qiáng)，靈敏度高，可為人促紅素原液及注射劑中二聚體和高分子量物質(zhì)的質(zhì)量控制提供參考。

采用 TSKgel G3000SW 色譜柱測(cè)定人促紅素中二聚體及高分子量物質(zhì)

促紅細(xì)胞生成素

(Erythropoietin ; Epo)

【基本信息】

促紅細(xì)胞生成素（EPO）又稱紅細(xì)胞刺激因子、促紅素，是一種人體內(nèi)源性糖蛋白激素，可刺激紅細(xì)胞生成。缺氧可刺激促紅細(xì)胞生成素產(chǎn)生，已有重組人促紅細(xì)胞生成素用于臨床，用于治療腎功能不全合并的貧血、獲得性免疫缺陷綜合征/艾滋病本身或治療引起的貧血、惡性腫瘤伴發(fā)的貧血及風(fēng)濕病貧血等多種貧血。這里采用 TSKgel G3000SW 色譜柱建立了測(cè)定人促紅素二聚體及高分子量物質(zhì)含量的方法。

【分析條件】

色譜柱： TSKgel G3000SW（7.8 mm I.D. ×60 cm）

流動(dòng)相：磷酸鹽緩沖液（磷酸二氫鉀 0.2 g、無水磷酸-氫二鈉 1.2 g 和氯化鈉 23.5 g，加水溶解稀釋成 1 L，調(diào) pH 至 7.4）

流速： 0.5 mL/min

進(jìn)樣體積：50 μL

柱溫： 30 ℃

檢測(cè)器： UV @214nm

【溶液配制】

供試品溶液：取供試品，按照供試品的蛋白含量，用流動(dòng)相稀釋成含蛋白 0.4 mg/ml 的溶液，混勻，作為供試品溶液。

分離度溶液：取 EPO-SEC CRS 歐洲標(biāo)準(zhǔn)品 1 瓶（蛋白含量 100 μg），精密加入 250 μL 流動(dòng)相，用流動(dòng)相溶解并稀釋制成 0.4 mg/mL 溶液，作為分離度溶液。

對(duì)照品溶液：精密量取分離度溶液20 μL，加980 μL流動(dòng)相稀釋成0.008 mg/ml溶液，混勻，作為對(duì) 照品溶液。

【分析結(jié)果】

TSKgel G3000SW 21.5*300凝膠柱006728

圖 1 HPLC 圖

（A）空白溶液；（B）EPO 分離度溶液

【結(jié)果與討論】

采用TSKgel G3000SW色譜柱參照《英國藥典》和《歐洲藥典》的方法，建立測(cè)定人促紅素中二聚體和高分子量物質(zhì)含量的方法，分析譜圖見圖1。結(jié)果顯示：?jiǎn)误w峰的保留時(shí)間約為30~35 min。分離度溶液中二聚體與單體峰之間的分離度均大于1.5。以信噪比S/N ≥ 3為檢測(cè)限，單體峰濃度檢測(cè)限為：0.002 mg/mL 。該方法專屬性強(qiáng)，靈敏度高，可為人促紅素原液及注射劑中二聚體和高分子量物質(zhì)的質(zhì)量控制提供參考。