色譜柱的發(fā)展與應(yīng)用

時(shí)間：2026/7/22

一、色譜柱由柱管、壓帽、卡套(密封環(huán))、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成。

　　二、色譜是一種分離分析手段，分離是核心，因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對(duì)色譜柱的要求是柱效高、選擇性好，分析速度快等。市售的用于HPLC的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相、氧化鋁、有機(jī)聚合物微球(包括離子交換樹(shù)脂)、多孔碳等，其粒度一般為3,5,7,10μm等，柱效理論值可達(dá)5~16萬(wàn)/米。對(duì)于一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效；對(duì)于同系物分析，只要500即可；對(duì)于較難分離物質(zhì)對(duì)則可采用高達(dá)2萬(wàn)的柱子，因此一般10~30cm左右的柱長(zhǎng)就能滿(mǎn)足復(fù)雜混合物分析的需要。

　　三、種類(lèi)：

　?、俪Ｒ?guī)分析柱(常量柱)，內(nèi)徑2~5mm(常用4.6mm，國(guó)內(nèi)有4mm和5mm)，柱長(zhǎng)10~30cm；

　?、谡瓘街?narrowbore，又稱(chēng)細(xì)管徑柱、半微柱semi-microcolumn)，內(nèi)徑1~2mm，柱長(zhǎng)10~20cm；

　　③毛細(xì)管柱(又稱(chēng)微柱microcolumn)，內(nèi)徑0.2~0.5mm；

　　④半制備柱，內(nèi)徑>5mm；

　?、輰?shí)驗(yàn)室制備柱，內(nèi)徑20~40mm，柱長(zhǎng)10~30cm；

　?、奚a(chǎn)制備柱內(nèi)徑可達(dá)幾十厘米。柱內(nèi)徑一般是根據(jù)柱長(zhǎng)、填料粒徑和折合流速來(lái)確定，目的是為了避免管壁效應(yīng)。

　　四、維護(hù)：

　　硅膠柱以正已烷(或庚烷)、二氯甲烷和甲醇依次沖洗，然后再以相反順序依次沖洗，所有溶劑都必須嚴(yán)格脫水。甲醇能洗去殘留的強(qiáng)極性雜質(zhì)，已烷使硅膠表面重新活化。反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷(或氯仿)依次沖洗，再以相反順序依次沖洗。如果下一步分析用的流動(dòng)相不含緩沖液，那么可以省略最后用水沖洗這一步。一氯甲烷能洗去殘留的非極性雜質(zhì)，在甲醇(乙腈)沖洗時(shí)重復(fù)注射100~200μl*數(shù)次有助于除去強(qiáng)疏水性雜質(zhì)。*與乙腈或甲醇的混合溶液能除去類(lèi)脂。有時(shí)也注射二甲亞砜數(shù)次。此外，用乙腈、丙酮和三氟醋酸(0.1%)梯度洗脫能除去蛋白質(zhì)污染。

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色譜柱的發(fā)展與應(yīng)用

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