蛋白酶（EC 3.4.21.4）是一種內(nèi)肽酶，其優(yōu)先水解酯鍵，該酯鍵的羧基由賴氨酸（Lys）或精氨酸（Arg）提供，除非其中一個之后是脯氨酸（Pro）。它用于許多生物技術(shù)過程，例如組織分解、細(xì)胞收獲和細(xì)胞傳代培養(yǎng)。盡管來自?；蜇i胰腺的天然胰蛋白酶已經(jīng)存在多年，但現(xiàn)在有更嚴(yán)格的法規(guī)來確保更安全的生物制品和生物制藥。諾維信（Novozymes）提供rTrypsin，一種通過微生物發(fā)酵生產(chǎn)的重組產(chǎn)
胰蛋白酶(EC 3.4.21.4)是一種內(nèi)肽酶，其優(yōu)先水解酯鍵，該酯鍵的羧基由賴氨酸(Lys)或精氨酸(Arg)提供，除非其中一個之后是脯氨酸(Pro)。它用于許多生物技術(shù)過程，例如組織分解、細(xì)胞收獲和細(xì)胞傳代培養(yǎng)。盡管來自牛或豬胰腺的天然胰蛋白酶已經(jīng)存在多年，但現(xiàn)在有更嚴(yán)格的法規(guī)來確保更安全的生物制品和生物制藥。諾維信(Novozymes)提供rTrypsin，一種通過微生物發(fā)酵生產(chǎn)的重組產(chǎn)品。胰蛋白酶不含動物成分，按照ISO 9001：2008標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)。
rTrypsin的應(yīng)用
• 包括干細(xì)胞在內(nèi)的多種細(xì)胞系的細(xì)胞解離和增殖
• 疫苗生產(chǎn)加工
• 在細(xì)胞固定和分選之前分離切割的細(xì)胞•
rTrypsin的優(yōu)點
• 通過重組生產(chǎn)工藝生產(chǎn)的胰蛋白酶不受動物酶如胰凝乳蛋白酶或羧肽酶的污染。
• 無動物來源(AOF)生產(chǎn)工藝消除了最終產(chǎn)品中病毒和動物相關(guān)污染物的風(fēng)險
• 允許簡單替換?；蜇i胰蛋白酶
• 穩(wěn)定性不受Ca2+的影響• 穩(wěn)定一致的供應(yīng)
rTrypsin穩(wěn)定性
• rTrypsin是一種顆粒狀產(chǎn)品
• rTrypsin的特殊穩(wěn)定性使得在細(xì)胞培養(yǎng)過程中酶的儲存和常規(guī)處理變得容易和方便
rTrypsin專一性rTrypsin像天然胰蛋白酶一樣在賴氨酸和精氨酸的羧基側(cè)切割肽鍵。這代表rTrypsin可以簡單地替代豬或牛胰蛋白酶rTrypsin 酶特異性在pH 9.0 (Suc-AAPX-pNA)
底物：Suc-AAPA-PNA，Suc-AAPR-PNA，Suc-AAPD-PNA、Suc-AAPIPNA、Suc-aapm-PNA，Suc AAPV-PNA，Suc AAPL-PNA，SucA-APEPNA，SucA-APK-PNA，Suca-AAPF-PNA.
測定緩沖液：100mM琥珀酸，100mM HEPES，100mM CHES，100mMCABS，1mM CaCl2，150mM KCl，0.01%Triton X-100，pH9.0。
測定：20μ 重組胰蛋白酶/豬胰蛋白酶(在0.01%Triton X-100中稀釋)與100μl測定緩沖液在微量滴定板孔中混合。
通過加入100μl PNA底物(50mg PNA底物溶解在1.0ml DMSO中，并進(jìn)一步用0.01%Triton X-100稀釋45倍)開始測定。監(jiān)測OD405的增加作為胰蛋白酶/豬胰蛋白酶活性的量度
rTrypsin用于分離細(xì)胞胰蛋白酶可用于來自粘附于培養(yǎng)容器內(nèi)表面生長的單層的細(xì)胞。rTrypsin在干細(xì)胞系如IPH和HES以及CHO、Vero和MDCK細(xì)胞系上表現(xiàn)良好。最常見的方法是用胰蛋白酶/EDTA/PBS緩沖液(調(diào)節(jié)至pH 7)處理，將細(xì)胞從培養(yǎng)基質(zhì)中去除。根據(jù)細(xì)胞系的不同，建議的rTrypsin濃度應(yīng)調(diào)節(jié)至0.2 mg/mL(相當(dāng)于200 U/mL活性為1000 USP/mg粉末的rTrypsin)，并進(jìn)行無菌過濾。
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