篤瑪  牛白介素9(IL-9) ELISA 試劑盒  產(chǎn)品介紹

樣品測定

1． 移取xx微升 去干擾液（Reagent C）到上述待測樣品或標準樣品管里，混勻
2． 加入xx微升 反應液（Reagent D）
3． 加入xx微升 顯色液（Reagent E），混勻
4． 室溫下孵育20分鐘
5． 放進微型臺式離心機離心3分鐘，速度為5000g
6． 移取1毫升上清液到比色皿
7． 即刻放進分光光度儀檢測，獲得待測樣品和標準樣品讀數(shù)



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樣品準備

1． 手術(shù)取出動物組織，并秤重以確定200毫克組織重量 
2． （選擇步驟）放進預冷的15毫升錐形離心管
3． （選擇步驟）加入xx毫升 清理液（Reagent A）清洗1次
4． 即刻用刀片切碎組織
5． 放進一個預冷的15毫升錐形離心管
6． 加入預冷的xx毫升 清理液（Reagent A）
7． 渦旋震蕩5秒，充分混勻
8． 即刻放入預冷的DOUNCE勻漿器，在冰槽里用勻漿棒勻化組織（約40至80下）
9． 將所有組織勻漿物移入1.5毫升離心管
10． 放進4℃臺式離心機離心10分鐘，速度為10000g
11． 移取500微升到新的1.5毫升離心管
12． 加入xx微升 穩(wěn)定液（Reagent B），混勻
13． 放在冰槽里待測（注意：須1周內(nèi)使用）
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操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
500ng/L 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
250ng/L 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
125ng/L 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
62.5ng/L 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
31.25ng/L 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液


2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準

確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，

盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
4. 配液：將30倍（48T的20倍）濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。