篤瑪 雞蛋白聚糖4(PRG4) ELISA 試劑盒  產(chǎn)品說(shuō)明

ELISA 實(shí)驗(yàn)步驟：
1.包被抗原：稀釋液pH 9.6 碳酸鹽緩沖液，多肽濃度2ug/ml，0.1ml/孔，4oC過(guò)夜，洗凈。
2.1%BSA (pH 9.6 碳酸鹽緩沖液) 封閉，0.1ml/孔，37oC1h，洗凈。
3.稀釋抗血清(可稀釋不同濃度) 0.1ml/孔，37oC 30分鐘，洗凈。
4.稀釋辣根過(guò)氧化物每標(biāo)記的二抗0.1ml/孔，37oC 40分鐘，洗凈。
5.顯色：TMB顯色
A液：四甲基聯(lián)苯胺10mg 溶于DMF1ml中，再用pH5.0檸檬酸緩沖液稀釋100倍.
B液：5ul雙氧水加蒸餾水12.5ml 。
終止液：2N硫酸
A液、B液各一滴，比光顯色10分鐘，終止液一滴。
6.450nm 波長(zhǎng)測(cè)OD值操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
500ng/L 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
250ng/L 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
125ng/L 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
62.5ng/L 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
31.25ng/L 1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

篤瑪 雞蛋白聚糖4(PRG4) ELISA 試劑盒  產(chǎn)品說(shuō)明

標(biāo)準(zhǔn)樣品準(zhǔn)備
1． 移取xx微升 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent F）到新的1.5毫升離心管
2． 加入xx微升 穩(wěn)定液（Reagent B），混勻
3． 放在冰槽里待測(cè)

測(cè)定準(zhǔn)備

1． 準(zhǔn)備好待測(cè)樣品，置于冰槽里
2． 設(shè)定好分光光度儀：波長(zhǎng)670nm，并置零
篤瑪 雞蛋白聚糖4(PRG4) ELISA 試劑盒  產(chǎn)品說(shuō)明
標(biāo)本要求
1. 血清：
室溫血液自然凝固10-20 分鐘后，離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保
存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20 分鐘后，離心20
分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成應(yīng)再次離心。
3.尿液：
用無(wú)菌管收集。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀
形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
5.培養(yǎng)細(xì)胞:
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100 萬(wàn)/ml 左右。
通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20 分鐘左
右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
6.組織標(biāo)本:
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化
后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻
漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢
測(cè)，其余冷凍備用。
7.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)
行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
8.不能檢測(cè)含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。