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2010-3-14
細(xì)胞培養(yǎng)液中蛋白的濃縮收集方法
點(diǎn)擊次數(shù)： 208 作者：佚名 發(fā)表于：2010-03-28 23:43 轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明來(lái)自丁香園
問(wèn)：我要用上清液做Elisa，但是上清液中的蛋白濃度不夠，請(qǐng)問(wèn)有什么方法可以把蛋白濃縮一下?
答：蛋白質(zhì)濃縮技術(shù)是免疫學(xué)中常用的手段，現(xiàn)介紹幾種常用的濃縮技術(shù)。
1、透析袋濃縮法
利用透析袋濃縮蛋白質(zhì)溶液是應(yīng)用zui廣的一種。將要濃縮的蛋白溶液放入透析袋（無(wú)透析袋可用玻璃紙代替），結(jié)扎，把高分子（6 000－12 000）聚合物如聚乙二醇（碳蠟）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可將吸水劑配成30％－40％濃度的溶液，將裝有蛋白液的透析袋放入即可。吸水劑用過(guò)后，可放入溫箱中烘干或自然干燥后，仍可再用。
2、冷凍干燥濃縮法
這是濃縮蛋白質(zhì)的一種較好的辦法，它既使蛋白質(zhì)不易變性，又保持蛋白質(zhì)中固有的成分。它是在冰凍狀態(tài)下直接升華去除水分。具體做法是將蛋白液在低溫下冰凍，然后移置干燥器內(nèi)（干燥器內(nèi)裝有干燥劑，如NaOH、CaCl2和硅膠等）。密閉，迅速抽空，并維持在抽空狀態(tài)。數(shù)小時(shí)后即可獲得含有蛋白的干燥粉末。干燥后的蛋白質(zhì)保存方便，應(yīng)用時(shí)可配成任意濃度使用。也可采用凍干機(jī)進(jìn)行冷凍干燥。
3、吹干濃縮法
將蛋白溶液裝入透析袋內(nèi)，放在電風(fēng)扇下吹。此法簡(jiǎn)單，但速度慢，且溫度不能過(guò)高，不要超過(guò)15 ℃。
4、超濾膜濃縮法
此法是利用微孔纖維素膜通過(guò)高壓將水分濾出，而蛋白質(zhì)存留于膜上達(dá)到濃縮目的。有兩種方法進(jìn)行濃縮：一種是用醋酸纖維素膜裝入高壓過(guò)濾器內(nèi)，在不斷攪拌之下過(guò)濾；另一種是將蛋白液裝入透析袋內(nèi)置于真空干燥器的通風(fēng)口上，負(fù)壓抽氣，而使袋內(nèi)液體滲出。
5、凝膠濃縮法
選用孔徑較小的凝膠，如SephadexG25或G50，將凝膠直接加入蛋白溶液中。根據(jù)干膠的吸水量和蛋白液需濃縮的倍數(shù)而稱(chēng)取所需的干膠量。放入冰箱內(nèi)，凝膠粒子吸水后，通過(guò)離心除去。
6、濃縮膠濃縮法
濃縮膠是一種高分子網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的有機(jī)聚合物，具有很強(qiáng)的吸水性能。每克干膠可吸水120 ml-150 ml。它能吸收低分子量的物質(zhì)，如水、葡萄糖、蔗糖、無(wú)機(jī)鹽等，適宜濃縮10000分子量以上的生物大分子物質(zhì)。濃縮后，蛋白質(zhì)的回收率可達(dá)80％～90％。比濃縮膠應(yīng)用方便，直接加入被濃縮的溶液中即可。必須注意，濃縮溶液的pH值應(yīng)大于被濃縮物質(zhì)的等電點(diǎn)，否則在濃縮膠表面產(chǎn)生陽(yáng)離子交換，影響濃縮物質(zhì)的回收率。
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