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南通飛宇生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 植物單體提取物,標(biāo)準(zhǔn)品,ELISA試劑盒,生物試劑,細(xì)胞生物學(xué)產(chǎn)品 |
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2012-11-8
槲皮素含量的液相色譜測(cè)定方法
1.目的：
建立槲皮素含量測(cè)定的HPLC標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)操作規(guī)程。
2.范圍：
適用于槲皮素的含量檢測(cè)。
3.對(duì)照品：
槲皮素（Quercetin，Sigma 公司）
4.試劑：
4.1甲醇（色譜純）
4.2甲醇（分析純）
4.3磷酸（分析純）
4.4 水（超純水）
5.儀器：
5.1液相色譜儀：Waters 2695輸液泵；Waters 2487紫外檢測(cè)器；Empower色譜
數(shù)據(jù)工作系統(tǒng)
5.2 分析天平：感量0.00001g
5.3超聲波清洗儀：功率250W，頻率40KHz
5.4 玻璃流動(dòng)相過濾器（0.45μm）
5.5 針式微孔濾膜（0.45μm）
5.6 玻璃量器：量筒（100ml）、容量瓶（25、50ml）等。
6.溶液的制備：
6.1對(duì)照品溶液的制備：
精密稱取槲皮素對(duì)照品約10.0mg 于50ml 的容量瓶中，加入甲醇約40ml,超聲溶解后，放置至室溫，用甲醇定容至刻度，搖勻，即得。
6.2樣品溶液的制備：
精密稱取樣品約10mg于50ml的容量瓶中，加入甲醇約40ml,超聲溶解30分鐘后，
放置至室溫，用甲醇定容至刻度，搖勻，即得。
7.色譜條件：
色譜柱：Agilent SB-C18 （150mm×4.6 mm ,5um）
檢測(cè)波長(zhǎng):360nm
流速：1.0ml/min
柱溫：25℃
流動(dòng)相:甲醇：0.2%磷酸水溶液（55：45,v/v）
靈敏度:2.000AFUS
系統(tǒng)適應(yīng)性：理論塔板數(shù)以槲皮素峰計(jì)不得低于3000。
8.樣品測(cè)定：
在上述色譜條件下，等儀器穩(wěn)定基線平穩(wěn)后，精密吸取對(duì)照品溶液和樣品溶液各
10.0ul,分別進(jìn)樣測(cè)定，槲皮素的保留時(shí)間約為10分鐘，用面積外標(biāo)法計(jì)算樣品含量。
9.含量計(jì)算
% 100
0 0 1
1 0 1 ´
´ ´
´ ´ ´
=
A V W
A W V K 含量（ ）
其中 A1：樣品溶液中槲皮素的峰面積
A0：對(duì)照品溶液中槲皮素的峰面積
W1：樣品的稱樣量mg
W0：對(duì)照品的稱樣量mg
V1：樣品的體積mL
V0：對(duì)照品的體積mL
K： 對(duì)照品的純度
樣品含量結(jié)果取兩個(gè)平行樣品含量的平均值。http://m.jjhengye.com/st31771/Index
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