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南通飛宇生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： 植物單體提取物,標準品,ELISA試劑盒,生物試劑,細胞生物學產(chǎn)品 |
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2012-11-8
免疫測定的實驗設(shè)計主要涉及到抗體或抗原的使用濃度、溫育溫度、溫育時間、測定模式是采用競爭抑制或雙夾心直接測定，以及雙夾心測定是采用一步還是兩步法等，其對測定的影響主要是試驗的測定下限、特異性和簡便性等。一般來說，較高的抗體或抗原反應(yīng)濃度、較高的溫育溫度（如37度而非室溫下）、較長的溫育時間可以改善免疫試驗的測定下限，但這一切又只是相對的，還要從試驗的實際應(yīng)用著想，進行合理的優(yōu)化。雙抗夾心酶免疫試驗由于其簡單方便，又具有較好的測定下限和特異性，在大多數(shù)蛋白激素和腫瘤標志物的測定上，現(xiàn)已基本上取代了放免競爭抑制試驗。雙抗夾心測定模式以兩步法進行（即臨床樣本與酶標抗體分兩步加入），可避免許多用一步法時可能會出現(xiàn)的問，題，如與標記抗體可能發(fā)生交叉反應(yīng)但與固相捕獲抗體無交叉反應(yīng)的物質(zhì)可在*步溫育后的洗滌步驟中去除；又如一步法常出現(xiàn)的“鉤狀”效應(yīng)（即抗原濃度很高時反應(yīng)顯色反而很淺，表現(xiàn)為測定假陰性）使用兩步法就可以避免。但由于兩步法所需測定時間相對要長一些，因此目前在臨床實驗室中使用較多的是一步法。此外，當所測物質(zhì)分子大小不一致時，大分子的反應(yīng)通常較小分子要慢，如溫育時間短，也會造成測定偏差。例如，在測定復合的前列腺特異抗原（PSA）（Mr90kD）時，如使用較短的溫育時間，與游離PSA相比，其結(jié)果將偏低。
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