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快速選擇二級試劑的有效方法

2012-10-12  

提 供 商 上海隆壘生物科技有限公司 資料大小 44KB
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資料類型 WORD 文檔
【詳細說明】

快速選擇二級試劑的有效方法 
    免疫化學技術的成功與否常取決于選擇一個良好的二級試劑。二級試劑用于鑒定免疫染色和免疫印跡中未標記的*抗體的位置。選擇*二級試劑時主要應考慮4個方面的因素:①二級試劑所產(chǎn)生的背景;②檢測試劑的靈敏度;③商業(yè)來源試劑的滴度;④與*抗體相互作用的特異性。
 
一、二級試劑產(chǎn)生的背景
    在任何試驗中由二級試劑引起的背景問題可以設立不加*抗體的對照評估。*的二級試劑在無*抗體存在時應不產(chǎn)生可檢測的信號。實際上,很少能獲得這種理想的結(jié)果,但一個良好的二級試劑本身所產(chǎn)生的背景應當相當?shù)汀?br />    長期存放的二級試劑常發(fā)生凝聚或變性,所以連續(xù)監(jiān)測背景就顯得特別重要,這不僅在評價有效的商用二級試劑時極為重要,在實驗中也應作為常規(guī)要求。這對細胞和組織免疫染色特別適合,因此在每一次試驗中,應將不加*抗體作為對照。
 
二、商業(yè)來源試劑的靈敏度
    二級試劑的靈敏度取決于兩方面的因素,即選擇適當?shù)臉擞浳锛笆煜さ呐悸?lián)技術。應通過比較不同的商業(yè)貨源測試第二試劑標記的偶聯(lián)效果。  
    從不同的公司購買數(shù)批有效的二級試劑,并在相同的實驗室條件下做對比試驗,此類試驗應該穩(wěn)定可靠,容易重復。盡量從不同的公司選擇合適的供應批次,通過鑒定證實一批好試劑后,應根據(jù)需要購買,并留少量樣品作為下次試驗的標準。一旦選定較好的批號,應與廠商保持。
 
三、商業(yè)來源試劑的滴度
    分析不同廠商的產(chǎn)品需考慮的一個重要因素是使用該試劑的有效滴度,例如1mg標記抗體的成本在不同的廠家差異很大。某些商業(yè)化抗體,雖然其單位重量成本較高,但一般可作10倍稀釋后使用,故此類試劑更具有應用價值。
    此外,使用較高稀釋倍數(shù)的二級試劑可產(chǎn)生更清晰的背景。因此,應選擇能在較低滴度使用的二級試劑。所有的稀釋一定要使用含蛋白的緩沖液,例如含3%BSA的PBS,低濃度蛋白有變性的傾向,增加了非特異性相互作用的可能性,抵消了高倍稀釋的優(yōu)勢。
 
四、特異性
    影響選擇二級試劑的zui后一個因素是其識別*抗體的特異性。如果需要在含有其他競爭性的蛋白中識別*抗體時,測定交叉反應極為重要。zui常見的情況是免疫染色樣本中含有來自宿主器官的抗體,或是雙抗體標記的熒光試驗



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