2 1.1 實驗開始前請將所有試劑于盒外充分恢復(fù)至室溫（25±2℃），時間約2小時?；販刂潦?/div>
溫（25±2℃）后再取出微孔條，多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存
注：一定保證回溫充分，否則影響檢測的度和準(zhǔn)確度。
2.1.2 使用后請立即將試劑放回2~8℃保存
2.1.3 請不要改變分析程序
2.1.4 請使用的微量移液器
2.1.5 操作一旦開始，請不要中斷任何程序
2.1.6 ELISA結(jié)果的可重復(fù)性極大程度的取決于操作程序，請嚴(yán)格按照要求操作
2.1.7 為避免交叉污染，每個標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣
2.1.8 加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面
2.2 分析步驟
2.2.1 預(yù)*行編號，標(biāo)記B0、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置，推薦進(jìn)行雙孔檢測
2.2.2 取所需數(shù)量的微孔（微孔條可拆），將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存
2.2.3 樣品稀釋液（10×）、濃縮洗滌液（20×）稀釋成工作液（蒸餾水或去離子水稀釋）
2.2.4 在B0孔中加入50μl0.0 ng/ ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液
2.2.5 在各標(biāo)準(zhǔn)孔中加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液
2.2.6 在各樣品孔中加入50μl樣品溶液
2.2.7 在所有孔中加入50μl的抗除蟲菊酯（Pyrethrins）抗體酶結(jié)合物
2.2.8 輕輕晃動反應(yīng)板幾秒鐘。
2.3 37℃溫浴30min （溫浴過程中不時輕拍反應(yīng)板，可以減少雙孔誤差）
2.3.1 甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板5次，zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液
3
體。
2.4 反應(yīng)
2.4.1 洗滌程序完成后，立即用微量移液器在每個微孔中先加入50μl顯色液A，再加 50μl顯
色液B；輕微晃動反應(yīng)板使之*混勻
2.4.2 37℃溫浴10min
2.4.3 每孔中加入50μl終止液，混勻
2.4.4 在450nm下檢測吸光度，結(jié)果在5min內(nèi)讀取。
3 結(jié)果計算
3 .1定量分析
3 .1.1所獲得的每個濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以*個標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）
的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。
B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0μg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
3.1.2以除蟲菊酯（Pyrethrins）濃度的對數(shù)值為X軸，百分吸光度值為Y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
根據(jù)樣品百分吸光度值，可從曲線上得到對應(yīng)點的橫坐標(biāo)，即為除蟲菊酯（Pyrethrins）濃度的
對數(shù)值，求得反對數(shù)即為測定液中除蟲菊酯（Pyrethrins）濃度C（ng/ml）
3.1.3由于樣品經(jīng)過了預(yù)先稀釋，因此根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋
倍數(shù)。
3.2 半定量測定
3.1.1目測半定量測定：首先選擇一個適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運行，根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品吸光
度值的高低比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。
3.1.2儀器半定量測定：首先選擇一個適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運行，根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品顏色
深淺比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。
4 特異性
物質(zhì) 交叉反應(yīng)
除蟲菊酯（Pyrethrins） 100%
5試劑盒參數(shù)
本試劑盒檢測下限為0.05 ng/ml
B0吸光度*值應(yīng)大于1.0
試劑盒吸光度板內(nèi)誤差小于8％，板間誤差小于15％。
用本說明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80％。
6 標(biāo)準(zhǔn)曲線模式（僅供參考）
試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍為0ng/ml~4ng/ml 。
7分析限制
本試劑盒檢測為陽性的樣品應(yīng)該用另一種方法如HPLC或GC/MS加以確證。
準(zhǔn)會員.png)
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