1 樣品處理程序（樣品在提取過程中，要嚴格按說明書操作，提取過程中應準確稀釋，否則
會出現結果不準確，樣品應當保存在陰涼避光之處及冷藏保存）
1.1取10g粉碎的樣品，加 20ml 70%甲醇溶液
1.2強力振蕩3分鐘
1.3用Whatman 濾紙過濾
1.4取25μl處理后的樣品，加入25μl樣本稀釋液于反應孔中（樣本稀釋倍數為2）
2 酶免分析步驟
2.1 實驗須知
2 1.1 實驗開始前請將所有試劑于盒外充分恢復至室溫（25±2℃），時間約2小時?；販刂潦?/div>
溫（25±2℃）后再取出微孔條，多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存
注：一定保證回溫充分，否則影響檢測的度和準確度。
2.1.2 使用后請立即將試劑放回2~8℃保存
2.1.3 請不要改變分析程序
2.1.4 請使用的微量移液器
2.1.5 操作一旦開始，請不要中斷任何程序
2.1.6 ELISA結果的可重復性極大程度的取決于操作程序，請嚴格按照要求操作
2.1.7 為避免交叉污染，每個標準品和樣品均應使用不同的吸頭加樣
2.1.8 加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內表面
2.2 分析步驟
2.2.1 預*行編號，標記B0、標準品和樣品的位置，推薦進行雙孔檢測
2.2.2 取所需數量的微孔（微孔條可拆），將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存
2.2.3 樣品稀釋液（10×）、濃縮洗滌液（20×）稀釋成工作液（蒸餾水或去離子水稀釋）
2.2.4 在B0孔中加入50μl0.0 ng/ ml標準品溶液
2.2.5 在各標準孔中加入50μl的標準品溶液
2.2.6 在各樣品孔中加入50μl樣品溶液
2.2.7 在所有孔中加入50μl的抗除蟲菊酯（Pyrethrins）抗體酶結合物
2.2.8 輕輕晃動反應板幾秒鐘。
2.3 37℃溫浴30min （溫浴過程中不時輕拍反應板，可以減少雙孔誤差）
2.3.1 甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板5次，zui后一次應在吸水紙上拍打以*除去孔中液
3
體。
2.4 反應
2.4.1 洗滌程序完成后，立即用微量移液器在每個微孔中先加入50μl顯色液A，再加 50μl顯
色液B；輕微晃動反應板使之*混勻
2.4.2 37℃溫浴10min
2.4.3 每孔中加入50μl終止液，混勻
2.4.4 在450nm下檢測吸光度，結果在5min內讀取。
3 結果計算
3 .1定量分析
3 .1.1所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以*個標準（0標準）
的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。
B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0μg/L標準溶液的平均吸光度值
3.1.2以除蟲菊酯（Pyrethrins）濃度的對數值為X軸，百分吸光度值為Y軸，繪制標準曲線圖。
根據樣品百分吸光度值，可從曲線上得到對應點的橫坐標，即為除蟲菊酯（Pyrethrins）濃度的
對數值，求得反對數即為測定液中除蟲菊酯（Pyrethrins）濃度C（ng/ml）
3.1.3由于樣品經過了預先稀釋，因此根據標準曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋
倍數。
3.2 半定量測定
3.1.1目測半定量測定：首先選擇一個適當的標準液與樣品同運行，根據樣品與標準品吸光
度值的高低比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值。
3.1.2儀器半定量測定：首先選擇一個適當的標準液與樣品同運行，根據樣品與標準品顏色
深淺比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值。
4 特異性
物質 交叉反應
除蟲菊酯（Pyrethrins） 100%
5試劑盒參數
本試劑盒檢測下限為0.05 ng/ml
B0吸光度*值應大于1.0
試劑盒吸光度板內誤差小于8％，板間誤差小于15％。
用本說明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80％。
6 標準曲線模式（僅供參考）
試劑盒提供的標準曲線范圍為0ng/ml~4ng/ml 。
7分析限制
本試劑盒檢測為陽性的樣品應該用另一種方法如HPLC或GC/MS加以確證。
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