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原代細(xì)胞培養(yǎng)中的常見錯誤

時(shí)間:2022/5/23
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當(dāng)培養(yǎng)原代細(xì)胞時(shí),重要的是要記住,他們不是細(xì)胞系,不能同等對待。這里有六個在原代細(xì)胞培養(yǎng)中的常見錯誤,以及如何糾正這些錯誤。供大家參考。

錯誤1:一小管原代細(xì)胞在水浴中解凍一段時(shí)間

糾正1:原代細(xì)胞對解凍過程非常敏感,因此將小瓶置于37℃水浴中,保持并輕輕旋轉(zhuǎn)直到內(nèi)容物剛剛解凍是很重要的。然后應(yīng)立即從水浴中取出小瓶,并轉(zhuǎn)移到無菌操作臺。確保您的培養(yǎng)瓶在解凍前已經(jīng)準(zhǔn)備就緒,以便可以立即用于接種細(xì)胞,并置于培養(yǎng)箱中。

錯誤2:解凍match小瓶后直接離心原代細(xì)胞

糾正2:我們不建議在解凍后離心細(xì)胞,因?yàn)殡x心程序比少量的DMSO殘留更有害。記住,在恢復(fù)原代細(xì)胞后的第二天更換培養(yǎng)基以去除任何殘留的DMSO。

錯誤3:允許原代細(xì)胞變得過于融合

糾正3:當(dāng)生長至100%匯合時(shí),原代細(xì)胞可以變得衰老。記住,原代細(xì)胞不是100%純,因此重要的是盡量減少污染細(xì)胞的生長。我們建議在細(xì)胞達(dá)到90-95%融合時(shí),對原代細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

錯誤4:傳代原代細(xì)胞時(shí)過度胰蛋白酶消化

糾正4:當(dāng)細(xì)胞傳代時(shí),使用低濃度的胰蛋白酶并在顯微鏡下密切監(jiān)測細(xì)胞。此外,記得在胰蛋白酶消化后*中和細(xì)胞中的胰酶,因?yàn)槿魏位钚缘囊鹊鞍酌付紝p傷細(xì)胞。


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