細胞裂解的方法包括化學(xué)裂解法、酶裂解法和機械裂解法。化學(xué)裂解法和酶裂解法通常是比較溫和的方法，通常不會使很多的DNA斷裂。這兩種方法（包括SDS和溶菌酶處理等）時提取以及純化DNA常用的方法。機械裂解可以均一的裂解細胞，同化學(xué)裂解相比，機械處理具有更高更強的裂解效率和更低的選擇性。機械處理可以更劇烈的和全面的裂解細胞，但會造成DNA的斷裂。
一、機械裂解法主要有以下兩種：
1、熱休克法（Thermalshock），既反復(fù)凍溶法，是一種常用的機械裂解方式，通常由冷凍和解凍兩部分組成（freezingandthawing）,。原理：由于細胞內(nèi)冰粒的形成和剩余細胞液的鹽濃度增高引起溶脹，使細胞結(jié)構(gòu)破碎。冷凍通常在液氮或-20°C冰上進行，解凍可以在37、50、65或100℃水浴中進行。熱休克比化學(xué)裂解更加溫和，但是很有效，有資料表明用熱休克和溶菌酶與SDS的方法獲得了90%的細胞裂解率。
2、超聲波處理（Ultrasonication）既利用超聲加熱的方法，把細胞破碎。但這種處理會導(dǎo)致DNA的斷裂，所以加熱不宜過劇烈，要設(shè)定好超聲時間和間隙時間，一般超聲時間不超過5秒，間隙時間大于超聲時間，這些都有利于保護酶的活性。bead-beating也是常用的機械處理方式，有報道指出bead-beating比熱休克和化學(xué)裂解的細胞裂解效果更好雖然DNA產(chǎn)量較高，但通常得到的DNA的片段較小。
二、化學(xué)裂解和酶裂解法（在提核酸時聯(lián)合使用）
主要是裂解液處理法，細胞裂解液的主要目的有以下幾種：（1）利用去污劑破壞脂質(zhì)雙分子層，破裂細胞；（2）溶解蛋白；（3）蛋白變性使其穩(wěn)定；（4）抑制蛋白酶活性。
主要根據(jù)不同的目的，裂解液的組成有所不同，主要有提取核酸和蛋白兩中。在提取RNA或DNA時，我們主要是要充分裂解細胞，得到更多的核酸；如果我們的目的是蛋白，那要根據(jù)蛋白的位置、特性等因素考慮裂解液，在提取蛋白后，再根據(jù)實驗需要復(fù)性蛋白等。以下是細胞裂解中常用試劑和其作用：50mMTris-HClpH7.4（緩沖體系），150mMNaCl（等滲體系），1mMPMSF（*的蛋白酶抑制劑），1mMEDTA（變性劑和穩(wěn)定劑），5µg/mlAprotinin（蛋白酶抑制劑），5µg/mlLeupeptin（蛋白酶抑制劑），1%Tritonx-100（破壞細胞），1%Sodiumdeoxycholate（中度變性劑和蛋白溶解劑），0.1%SDS（強變性劑和蛋白溶解劑）。7M尿素，2M硫脲（可以提高膜蛋白的融解），蛋白酶K等。
TAG：超聲波裂解，機械裂解法，化學(xué)裂解，酶裂解法
柘城县|
金塔县|
永顺县|
团风县|
屯昌县|
济阳县|
磐石市|
晋州市|
叶城县|
东阳市|
信阳市|
涿鹿县|
平塘县|
枞阳县|
德清县|
德清县|
平安县|
基隆市|
新蔡县|
南皮县|
贵州省|
海盐县|
行唐县|
卓资县|
韶关市|
磐安县|
定陶县|
彭阳县|
收藏|
天门市|
台安县|
合江县|
外汇|
新泰市|
盐源县|
日土县|
桐庐县|
广元市|
武义县|
宣化县|
海丰县|