久久亚洲精品天码av,午夜福利屄插穴,午夜福利视频91,亚欧美爽爽爽爽爽,亚洲欧美日韩色色图片,青青操在线观看,精品天堂麻豆av,无码av东京热,婷婷成人亚洲少妇

行業(yè)產(chǎn)品

  • 行業(yè)產(chǎn)品

北京雅安達(dá)生物技術(shù)有限公司


當(dāng)前位置：北京雅安達(dá)生物技術(shù)有限公司>技術(shù)文章>感受態(tài)細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)
技術(shù)文章

感受態(tài)細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)

發(fā)布時(shí)間：2013-1-18

　　CaCl2感受態(tài)細(xì)胞的制備的實(shí)驗(yàn)步驟
　　
　　1．前夜接種受體菌（DH5α或DH10B），挑取單菌落于LB培養(yǎng)基中37℃搖床培養(yǎng)過(guò)夜（約16小時(shí)）；
　　
　　2．取1ml過(guò)夜培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接于100mlLB培養(yǎng)基中，在37℃搖床上劇烈振蕩培養(yǎng)約2.5-3小時(shí)（250-300rpm）；
　　
　　3．將0.1MCaCl2溶液置于冰上預(yù)冷；
　　
　　以下步驟需在超凈工作臺(tái)和冰上操作
　　
　　4．吸取1.5ml培養(yǎng)好的菌液至1.5ml離心管中，在冰上冷卻10分鐘；
　　
　　5．4℃下3000g冷凍離心5分鐘；
　　
　　6．棄去上清，加入100μl預(yù)冷0.1MCaCl2溶液，用移液槍輕輕上下吸動(dòng)打勻，使細(xì)胞重新懸浮，在冰放置20分鐘；
　　
　　7．4℃下3000g冷凍離心5分鐘；
　　
　　8．棄去上清，加入100μl預(yù)冷0.1MCaCl2溶液，用移液槍輕輕上下吸動(dòng)打勻，使細(xì)胞重新懸浮；
　　
　　9．細(xì)胞懸浮液可立即用于轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)或添加冷凍保護(hù)劑（15%-20%甘油）后超低溫冷凍貯存?zhèn)溆茫ǎ?0℃）。
　　
　　二、電轉(zhuǎn)化法制備大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)步驟
　　
　　1．前夜接種受體菌（DH5α或DH10B），挑取單菌落于LB培養(yǎng)基中37℃搖床培養(yǎng)過(guò)夜；
　　
　　2．取2ml過(guò)夜培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接于200mlLB培養(yǎng)基中，在37℃搖床上劇烈振蕩培養(yǎng)至OD600=0.6（約2.5-3小時(shí)）；
　　
　　3．將菌液迅速置于冰上。以下步驟務(wù)必在超凈工作臺(tái)和冰上操作
　　
　　4．吸取1.5ml培養(yǎng)好的菌液至1.5ml離心管中，在冰上冷卻10分鐘；
　　
　　5．4℃下3000g冷凍離心5分鐘；
　　
　　6．棄去上清，加入1500μl冰冷的10%甘油，用移液槍輕輕上下吸動(dòng)打勻，使細(xì)胞重新懸浮；
　　
　　7．4℃下3000g冷凍離心5分鐘
　　
　　8．棄去上清，加入750μl冰冷的10%甘油，用移液槍輕輕上下吸動(dòng)打勻，使細(xì)胞重新懸??；
　　
　　9．4℃下3000g冷凍離心5分鐘
　　
　　10．加入20μl冰冷10%的甘油，用移液器輕輕上下吸動(dòng)打勻，使細(xì)胞重新懸浮；
　　
　　11．立即使用或迅速置于-70℃超低溫保存。
　　
　　附注：
　　
　　影響感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化效率的因素及實(shí)際操作過(guò)程中應(yīng)注意的事項(xiàng)：
　　
　　1．細(xì)菌的生長(zhǎng)狀態(tài)：實(shí)驗(yàn)中應(yīng)密切注視細(xì)菌的生長(zhǎng)狀態(tài)和密度，盡量使用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞（一般通過(guò)檢測(cè)OD600來(lái)控制。DH5α菌株OD600為0.5時(shí)細(xì)胞密度是5×107/ml）；
　　
　　2．所有操作均應(yīng)在無(wú)菌條件和冰上進(jìn)行；
　　
　　3．經(jīng)CaCl2處理的細(xì)胞，在低溫條件下，一定的時(shí)間內(nèi)轉(zhuǎn)化率隨時(shí)間的推移而增加，24小時(shí)達(dá)到zui高，之后轉(zhuǎn)化率再下降（這是由于總的活菌數(shù)隨時(shí)間延長(zhǎng)而減少造成的）；
　　
　　4．化合物及無(wú)機(jī)離子的影響：在Ca2+的基礎(chǔ)上聯(lián)合其他二價(jià)金屬離子（如Mn2+或Co2+）、DMSO或還原劑等物質(zhì)處理細(xì)菌，可使轉(zhuǎn)化效率大大提高（100-1000倍）；
　　
　　5．所使用的器皿必須干凈。跡量的去污劑或其它化學(xué)物質(zhì)的存在可能大大降低細(xì)菌的轉(zhuǎn)化效率；
　　
　　6．質(zhì)粒的大小及構(gòu)型的影響：用于轉(zhuǎn)化的應(yīng)主要是超螺旋的DNA；
　　
　　7．一定范圍內(nèi)，轉(zhuǎn)化效率與外源DNA的濃度呈正比。

制藥網(wǎng) 設(shè)計(jì)制作，未經(jīng)允許翻錄必究 .? ? ? Copyright(C)?2021 http://m.jjhengye.com,All rights reserved.

以上信息由企業(yè)自行提供，信息內(nèi)容的真實(shí)性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé)，制藥網(wǎng)對(duì)此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。 溫馨提示：為規(guī)避購(gòu)買(mǎi)風(fēng)險(xiǎn)，建議您在購(gòu)買(mǎi)產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。

會(huì)員登錄

×

請(qǐng)輸入賬號(hào)

請(qǐng)輸入密碼

=

請(qǐng)輸驗(yàn)證碼

收藏該商鋪

請(qǐng) 登錄 后再收藏

提示

您的留言已提交成功！我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~
镇赉县| 芦溪县| 大丰市| 白银市| 甘泉县| 安龙县| 曲靖市| 彰武县| 水城县| 乌拉特后旗| 如皋市| 田林县| 民丰县| 绥化市| 平江县| 秭归县| 叙永县| 蛟河市| 铅山县| 莱芜市| 东莞市| 枣阳市| 汶上县| 五原县| 霸州市| 定边县| 石渠县| 古丈县| 镇沅| 甘孜| 杨浦区| 怀柔区| 榆中县| 分宜县| 新竹县| 策勒县| 革吉县| 台中县| 龙陵县| 饶阳县| 林芝县|