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北京方程嘉鴻科技有限公司
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更新時間：2015-07-21 00:14:50瀏覽次數(shù)：7193次
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小鼠Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)ELISA試劑盒
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ELISA步驟
1.包被
通過考馬斯亮藍(lán)法測定濃度后，用槍吹勻。按照實際使用量配制包被抗原量，包被濃度>10ug/ml,（蛋白如有不溶，滴加10%SDS后吹勻） 4攝氏度包被過夜，
2.洗板
包被完的板子，洗板一次，于吸水紙上拍干
3.封閉
200ul 封閉液/孔， 4攝氏度過夜，或者37度封閉2小時
4.洗板
封閉完的板子，洗板一次，于吸水紙上拍干
5.加一抗
加血清，以及純化的抗體，37度孵育1小時
6.洗板
洗板三次以上，于吸水紙上拍干
7.加二抗
加入羊抗兔二抗1：20000，37度孵育1小時
8.洗板
洗三次以上，于吸水紙上拍干，同時，配置好顯色液（TMB）
9.顯色
準(zhǔn)備好終止液后，加入顯色液100ul/孔，可以晃動板子加速顯色過程。
TMB顯色，到一定程度時（一般不能讓空白和陰性顯色太高），加入50ul/孔終止液，加入終止液后需要靜置10min以上，使終止*、顏色均一（可以晃動板子加速終止過程），終止后讀數(shù)
讀數(shù)，酶標(biāo)儀必須預(yù)熱30min以上；TMB顯色檢測波長為：450/630
zui后，打開相應(yīng)的酶標(biāo)儀測量軟件，讀數(shù)。講數(shù)據(jù)存儲到位置并*數(shù)據(jù)。
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