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北京免費(fèi)代測(cè) 小鼠血清剝奪反應(yīng)相關(guān)蛋白elisa試劑盒

發(fā)布時(shí)間:2018-1-5

北京免費(fèi)代測(cè) 小鼠血清剝奪反應(yīng)相關(guān)蛋白elisa試劑盒

【簡(jiǎn)單介紹】

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【詳細(xì)說(shuō)明】

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注意:不同廠家生產(chǎn)的試劑盒因生產(chǎn)工藝和操作方法略有不同,務(wù)必按照所用試劑盒嚴(yán)格操作,否則容易產(chǎn)生檢測(cè)結(jié)果的不確定性.

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儀器質(zhì)控為使儀器保持zuijia工作狀態(tài),應(yīng)建立維護(hù)和校正儀器的標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP),所要控制的儀器包括移液器(加樣槍?zhuān)?、溫箱、洗板機(jī)和酶標(biāo)儀?!蛞埔浩鳎?ELISA加樣量?。?0-200μl),其準(zhǔn)確性直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,利用稱(chēng)重法檢查:低、中、高三個(gè)刻度分別吸取指示量的水,萬(wàn)分之一天平稱(chēng)重后計(jì)算吸量是否準(zhǔn)確,一般應(yīng)在±5%以?xún)?nèi)◎恒溫箱: 經(jīng)常檢查恒溫箱溫度計(jì)所示的溫度和水中(或溫箱內(nèi))實(shí)測(cè)溫度是否一致,允許有±1℃的誤差◎洗板機(jī): 每個(gè)廠家設(shè)置洗板后的殘留液有各自的規(guī)定,一般不超過(guò)2μl

豬血管緊張素Ⅱelisa

 

注意事項(xiàng)1. 當(dāng)混合蛋白溶液時(shí)應(yīng)盡量輕緩,避免起泡。2. 洗滌過(guò)程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽(yáng)性。3. 一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。5. 如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高,請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以稀釋倍數(shù)。6. 在配制標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液工作液時(shí),請(qǐng)以相應(yīng)的稀釋液配制,不能混淆。7. 底物請(qǐng)避光保存。8. 不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。

 

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規(guī)格:48Wells/96Wells
保存:短期4℃/長(zhǎng)期-20℃保存
運(yùn)輸條件:2-8℃低溫運(yùn)輸,用干冰或者冰袋低溫運(yùn)輸。
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2.研究抗酶抗體的合成。
3.顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)。
4.定量檢測(cè)體液中抗原或抗體成份
 
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核黃素激酶(RFK)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)         ELISA Kit for Riboflavin Kinase (RFK)
網(wǎng)鈣蛋白2(RCN2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)         ELISA Kit for Reticulocalbin 2 (RCN2)
絲束蛋白1(PLS1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)         ELISA Kit for Plastin 1 (PLS1)
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NAD激酶(NADK)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)         ELISA Kit for NAD Kinase (NADK)
肌原調(diào)節(jié)蛋白2(MYOZ2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)         ELISA Kit for Myozenin 2 (MYOZ2)
肌間蛋白2(MYOM2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)         ELISA Kit for Myomesin 2 (MYOM2)
生肌因子5(MYF5)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)         ELISA Kit for Myogenic Factor 5 (MYF5)


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(2) 樣本編號(hào),分組信息請(qǐng)?zhí)峁└郊?br />(3)若創(chuàng)建附件,請(qǐng)對(duì)應(yīng)注明“詳細(xì)見(jiàn)附件”
ELISA試驗(yàn)中,各種檢驗(yàn)項(xiàng)目的誤差允許范圍均有待在實(shí)踐中得出結(jié)論,以上只是舉例說(shuō)明質(zhì)控方法,不是定論。2SD是一般*的允許誤差限度。每批測(cè)定放一份質(zhì)控血清時(shí),一次超過(guò)2SD應(yīng)作為"告警",二次超出2SD為"失控"。當(dāng)質(zhì)控過(guò)程中,出現(xiàn)失控時(shí),出現(xiàn)失控時(shí),應(yīng)查找原因,通常是試劑盒或質(zhì)控血清失效造成。更換試劑盒或更換質(zhì)控血清,找出原因糾正后重新檢驗(yàn)。如果檢驗(yàn)結(jié)果仍達(dá)不到要求或找不到原 因時(shí),應(yīng)重復(fù)進(jìn)行OCV的檢驗(yàn)。如果OCV檢驗(yàn)的結(jié)果仍是好的,說(shuō)明常規(guī)操作出現(xiàn)問(wèn)題。一般認(rèn)為:①一次超出3SD。②連續(xù)二次超出2SD。③3-5次連續(xù)處于一側(cè)的2SD之內(nèi)。 ④5~7次連續(xù)偏向橫軸的一側(cè),均為失控。5.2.1 質(zhì)控血清的使用 衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心制備的乙肝標(biāo)志物質(zhì)控血清,可以在-20℃保持半年定值不變。冰凍狀態(tài)融化使用時(shí),應(yīng)先混勻,未用完部分可在4℃保存5天。不宜反復(fù)冰融或自行分裝。開(kāi)展某項(xiàng)檢驗(yàn)的室內(nèi)質(zhì)控工作需要的質(zhì)控血清,一般按3-6個(gè)月用量準(zhǔn)備。自制的不定值質(zhì)控血清,在一批質(zhì)控血清將用完之前,需準(zhǔn)備下一批質(zhì)控血清。質(zhì)控血清要求性能穩(wěn)定,較長(zhǎng)期內(nèi)效價(jià)不變,其理化性質(zhì)應(yīng)與病人樣本相近,這樣才能有效地起到監(jiān)測(cè)作用。

 

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ELISA試劑盒在國(guó)內(nèi)有許多種叫法,例如:ELISA檢測(cè)試劑盒、ELISA Kit、酶聯(lián)免疫試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒、酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等,比較常見(jiàn)的叫法是ELISA檢測(cè)試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒等。

ELISA試劑盒自從60-70年代問(wèn)世以來(lái),得到*科研工作者的認(rèn)可及推崇,在歐美及中國(guó)獲得很大的推廣,尤其是國(guó)內(nèi)生化領(lǐng)域的長(zhǎng)足發(fā)展。

Elisa生物試驗(yàn)是一種敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡(jiǎn)便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。ELISA檢測(cè)試劑盒適用于體外定性檢測(cè)人血清或血漿中的抗人類(lèi)戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗體ELISA檢測(cè)。

 

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原理


ELISA 手工洗板 8道洗液頭免疫測(cè)定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng),所以任何的診斷試劑離不開(kāi)的原料,如抗原抗體,酶等。以前用于免疫測(cè)定的抗原通常為各種純化抗原,而抗體則為純化抗原免疫動(dòng)物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術(shù)得到的單克隆抗體,而抗原或抗體的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過(guò)各種化學(xué)合成方法制備。近年來(lái),隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測(cè)定試劑幾成為現(xiàn)實(shí)的新一代試劑,各種新型使用的測(cè)定方法也不斷出現(xiàn)。

HBsAg試劑特點(diǎn)(檢測(cè)模式:臨床抗體夾心法):包被抗體為山羊多抗。多抗具有高親和性和對(duì)抗原各種表位的反應(yīng)性。酶表抗體為與HBsAg有不同結(jié)合位點(diǎn)的鼠復(fù)合單位,可測(cè)得HBsAg變異樣品,提高檢測(cè)的特異性(99.98%)提高檢測(cè)的靈敏度,應(yīng)用Parl Ehrich 學(xué)說(shuō)(PEI)HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品,對(duì)ad標(biāo)準(zhǔn)品的靈敏度為0.05ng/ml對(duì)ay標(biāo)準(zhǔn)品靈敏度為0.025ng/ml

ELISA檢測(cè)試劑盒應(yīng)用定性?shī)A心免疫檢測(cè)技術(shù),用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條,這些多肽是中國(guó)型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強(qiáng)的肽段,分別來(lái)自于該毒株的開(kāi)放閱讀框2和開(kāi)放閱讀框3。將樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM抗體,這些抗體就會(huì)與HEV 的多肽抗原結(jié)合,并固定在上面,洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根過(guò)氧化物酶)酶結(jié)合物,經(jīng)第二次孵育后,酶結(jié)合物就會(huì)與*次孵育結(jié)合上的HEV IgM抗體相結(jié)合,洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育時(shí)會(huì)發(fā)生酶-底物反應(yīng),只有那些含有HEV IgM抗體和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會(huì)發(fā)生顏色變化,加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應(yīng),并在波長(zhǎng): 450nm處測(cè)量O.D.值,按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒的測(cè)試標(biāo)準(zhǔn), O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認(rèn)為是初試陽(yáng)性。

 

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用途

elisa技術(shù)流程ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí),受檢標(biāo)本(測(cè)定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開(kāi)。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。 ELISA可用于測(cè)定抗原,也可用于測(cè)定抗體。

然而,影響Elisa試驗(yàn)結(jié)果的因素很多,故加強(qiáng)各個(gè)環(huán)節(jié)的質(zhì)量保證才能充分發(fā)揮其方法學(xué)的優(yōu)點(diǎn)。


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特點(diǎn)

一、、靈敏、特異的抗體;

二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性;

三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;

四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類(lèi)型;

五、節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。

elisa試劑盒回收率是反應(yīng)待測(cè)物在樣品分析過(guò)程中的損失的程度,損失越少,回收率越高,如果作標(biāo)液1PPM,就是1毫克/升,而作出標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)為0.99毫克/升,就是說(shuō)你的回收率是99%,這個(gè)與真實(shí)成分有密切的關(guān)系,說(shuō)明方法的準(zhǔn)確度。比如水中總無(wú)機(jī)氯含量測(cè)定,樣品水中含有無(wú)機(jī)氯20mg/L,取100mL被測(cè)水樣品,加入0.1mL濃度為10mg/mL的含無(wú)機(jī)氯標(biāo)準(zhǔn)樣品,測(cè)定時(shí)忽略體積變化,如果測(cè)定出樣品中無(wú)機(jī)氯為2.98mg/L,則認(rèn)為回收率為99%。

折疊編輯本段制備方法

包括以下步驟:

1)抗原表位的計(jì)算機(jī)篩選;

2)抗原的制備;

3)血清的采集;

4)間接ELISA方法的建立;

5)間接ELISA方法的敏感性和特異性驗(yàn)證;

6)試劑盒的穩(wěn)定性驗(yàn)證;

7)對(duì)屠宰場(chǎng)進(jìn)行臨床檢測(cè)。該方法簡(jiǎn)單、快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性合格、重復(fù)性好。應(yīng)用本發(fā)明制得的試劑盒能有效檢出感染豬的戊型肝炎病毒,適用于大批量發(fā)病樣本的檢測(cè),可用于豬戊肝的快速診斷,并預(yù)防、控制豬戊肝病毒的流行和阻斷戊肝病毒由豬向人傳播。

折疊編輯本段組成結(jié)構(gòu)

1、 血清:操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2、 血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、 細(xì)胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、 組織勻漿:將組織加入適量生li鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。

5、 保存:如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

此IBL試劑盒能用于小鼠血清,EDTA血漿,細(xì)胞上清中白介素-6的定量檢測(cè)

試劑盒成分

1 預(yù)包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 96T

2 酶標(biāo)記抗體: (30倍濃縮)HRP標(biāo)記抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 0.4mL x 1

3 標(biāo)準(zhǔn)品: 重組小鼠白介素-6 0.5mL x 2

4 EIA緩沖液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 30mL x 1

5 標(biāo)記抗體稀釋液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 12mL x 1

6 顯色劑: TMB底物液 15mL x 1

7 終止液: 1N硫酸 12mL x 1

8 濃縮洗滌液: (40倍濃縮) 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 50mL x 1 操作說(shuō)明 1實(shí)驗(yàn)所需器材(但試劑盒沒(méi)有提供) 酶標(biāo)儀(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及燒杯 去離子水 冰箱(4°C) 坐標(biāo)紙(log/log) 吸水紙 試管(用于標(biāo)準(zhǔn)品稀釋) 溫育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性試劑管(用于濃縮酶標(biāo)記抗體和顯色劑)

折疊編輯本段操作方法

雙抗體夾心法

1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃ 過(guò)夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱(chēng)洗滌,下同)。

2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。

3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時(shí),洗滌。

4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。

5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以"+"、"-"號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。


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