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發(fā)布時間:2013-6-18
ELISA方法檢測 ELISA方法的基本原理和種類 ELISA試劑盒價格
ELISA的基本原理有三條:
(1)抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫學活性;
(2)抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結合物,而此種酶結合物仍能保持其免疫學和酶學活性;
(3)酶結合物與相應抗原或抗體結合后,可根據加入底物的顏色反應來判定是否有免疫反應的存在,而且顏色反應的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例的,因此,可以按底物顯色的程度顯示試驗結果。
由于ELISA法一方面是建立在抗原與抗體免疫學反應的基礎上,因而,具有特異性。而另一方面又由于酶標記抗原或抗體是酶分子與抗原或抗體分子的結合物,它可以催化底物分子發(fā)生反應,產生放大作用,正因為此種放大作用而使本法具有很高的敏感性。因此,ELISA法是一種既敏感又特異的方法。常用的ELISA有以下兩個方面。
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(一)測定抗原的,主要有四種方法。
1、競爭法(Competition method):方法的基本原理可見圖1:本法首先將特異性抗體吸附于固相載體表面,我們把抗原和抗體吸附到固相載體表面的這個過程,稱為包被(Coated),也可叫做致敏。經洗滌后分成兩組:一組加酶標記抗原和被測抗原的混合液,而另一組只加酶標記抗原,再經孵育洗滌后加底物顯色,這兩組底物降解量之差,即為我們所要測定的未知抗原的量。
這種方法所測定的抗原只要有一個結合部位即可,因此,對小分子抗原如激素和藥物之類的測定常用此法。該法的優(yōu)點是快,因為只有一個保溫洗滌過程。但需用較多量的酶標記抗原為其缺點。
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