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上海柏欣儀器設(shè)備廠
主營(yíng)產(chǎn)品: 干燥箱;培養(yǎng)箱;恒溫恒濕箱;人工氣候箱;光照培養(yǎng)箱; |
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上海柏欣儀器設(shè)備廠
主營(yíng)產(chǎn)品: 干燥箱;培養(yǎng)箱;恒溫恒濕箱;人工氣候箱;光照培養(yǎng)箱; |
2012-5-22
應(yīng)用zui廣的核酸濃縮法是酒精沉淀法。在中常液體濃度單價(jià)陽(yáng)離子存在下,參加一定量的酒精后,所形成有核酸沉淀可經(jīng)離心而回收,甚至于對(duì)低至pg量的DNA 或RNA,也可定量回收?;厥盏暮怂峥砂此枰后w濃度,再溶于合適的緩和沖突液中。
具徒手體操作時(shí),可向含樣品的小離心管中參加V/10單價(jià)陽(yáng)離子鹽儲(chǔ)存液2V無(wú)薄酒精,混勻,放冰水浴中15-30min,抽取目測(cè)均衡,0-4度,12000g,離心10min。吸棄上清,再另70酒精0.5-1ml,12000g,0-4度蕩滌離心2min。吸棄上清,沉淀用油泵抽干或敞開蓋子晾干后,溶于合適大小的緩和沖突液中。
單價(jià)陽(yáng)離子鹽的挑選,主要基于下述思索問(wèn)題:用CH3COOH銨可減損dNTP的共沉淀,但在往后要作核酸的磷酸化時(shí)應(yīng)防止用CH3COOH銨,因銨離子是T,多核苷酸激酶的猛烈制約劑。當(dāng)用較高液體濃度的酒精沉淀RNA時(shí),常用LiCl,因LiCl在酒精中溶解度頎長(zhǎng),不隨核酸共沉淀。包括SDS的核酸樣品,應(yīng)運(yùn)用NaCl,這時(shí)該去垢劑要70酒精中仍維持可溶。DNA 和RNA沉淀,大部分運(yùn)用CH3COOH鈉(pH5.2 )。