按照空白-500ng/mL-空白1-空白2的進(jìn)樣順序編輯序列，運行結(jié)束后根據(jù)目標(biāo)峰的峰面積計算500ng/mL濃度之后的第一針和第二針空白的殘留水平，結(jié)果如表2所示。 Bio inert系統(tǒng)新增多種自動進(jìn)樣器清洗方式，通過增加針清洗和閥清洗等方式殘留可降至0.1%以內(nèi)。

表2 生物惰性Frontier Bio Inert 不同進(jìn)樣器清洗程序儀器殘留對比表（以峰面積計算）

圖1 寡核苷酸的提取離子流圖（XIC）

圖2 寡核苷酸（ID-1）500ng/mL以及空白1殘留圖

圖3 寡核苷酸（ID-2）500ng/mL以及空白1殘留圖

圖4 寡核苷酸（ID-3）500ng/mL以及空白1殘留圖

圖5 寡核苷酸（ID-4）500ng/mL以及空白1殘留圖

將適量寡核苷酸（ASO）用處理后的大鼠血清上清液稀釋成濃度為1.0ng/mL，5.0ng/mL，10.0ng/mL，50.0ng/mL，100.0ng/mL，200ng/mL，500ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液分別進(jìn)樣分析。寡核苷酸線性結(jié)果如圖4所示，在1.0ng/mL~500ng/mL范圍內(nèi)線性良好，r2均大于0.999。

圖6 寡核苷酸（ASO）的標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果

重現(xiàn)性

將100ng/mL的寡核苷酸（ASO）樣品連續(xù)進(jìn)樣6次進(jìn)行重復(fù)性考察。保留時間重復(fù)性在0.24%-0.26%之間，峰面積重復(fù)性在0.84%-1.30%之間。（圖7-圖10）。

圖7 寡核苷酸ASO（ID-1）100ng/mL連續(xù)6針重復(fù)性結(jié)果表

圖8 寡核苷酸ASO（ID-2）100ng/mL連續(xù)6針重復(fù)性結(jié)果表

圖9 寡核苷酸ASO（ID-3）100ng/mL連續(xù)6針重復(fù)性結(jié)果表

圖10 寡核苷酸ASO（ID-4）100ng/mL連續(xù)6針重復(fù)性結(jié)果表

本方案采用科諾美生物惰性超高效液相色譜系統(tǒng)Frontier Bio Inert LC，該系統(tǒng)與質(zhì)譜儀聯(lián)用，采用新的自動進(jìn)樣器清洗方式，有效降低寡核苷酸非特異性吸附，線性最高點500ng/mL后空白殘留在0.1%以內(nèi)，在濃度范圍1ng/mL-500ng/mL內(nèi)線性良好，線性相關(guān)系數(shù)大于0.999，重復(fù)性好，滿足寡核苷酸藥物的精準(zhǔn)測定。