【參數(shù)信息】(細胞標記探針Bodi Fluor 488酸)
【簡單概述】(細胞標記探針Bodi Fluor 488酸)
The excitation and emission spectra of Bodi Fluor 488 are similar. Bodi Fluor 488 is a neutral molecule, and pH has little effect on its fluorescence.
Bodi Fluor 488 has bright fluorescence and good light resistance. It is often used as a tracer molecule for intracellular fluorescent imaging. As long as its carrier is permeable to cells, the conjugate of Bodi Fluor 488 is permeable to cells.
Bodi Fluor 488 has been used for developing fluorescent intracellular tracers.
Bodi Fluor 488的激發(fā)和發(fā)射光光譜相似,Bodi Fluor 488是中性分子,pH對它產(chǎn)生熒光影響很小。
Bodi Fluor 488熒光很亮,并且耐光性好,常作為細胞內熒光顯像的示蹤分子,只要其載體具有細胞滲透性,Bodi Fluor 488偶聯(lián)物就具有細胞滲透性。
Bodi Fluor 488 已用于開發(fā)熒光細胞內示蹤劑。
【具體使用方法】
將 BODIPY 488 粉末溶于 無水乙醇或 DMSO,配制成 1–5 mM 儲存液,避光保存于 -20℃。
細胞密度達 50–60% 匯合時,棄培養(yǎng)基,用預熱的 PBS 清洗 2 次。
加入 含染料的培養(yǎng)基(工作濃度通常為 1–10 μM),避光孵育 10–30 分鐘。
用緩沖液(不含 BSA/血清)重懸細胞至密度 1×10?/mL。
將 2×染料溶液(用相同緩沖液配制)與細胞懸液等體積混合,最終染料濃度為 1×,渦旋混勻后避光孵育。
孵育后棄染料,用 PBS 清洗 2–3 次去除殘留染料。
直接進行熒光成像(活細胞)或固定后成像(固定細胞)。
濃度需根據(jù)細胞類型優(yōu)化(建議梯度測試,如 1–20 μM)。
固定細胞時避免使用含甲醇的固定劑(破壞肌動蛋白結構)。
蛋白需溶解于 PBS(pH 7.4) ,濃度建議 ≥2.5 mg/mL(低于此濃度會降低標記效率)。
按 染料:蛋白 = 10:1 至 20:1(摩爾比)加入 BODIPY 488 NHS ester(需用 DMF 溶解至 13.65 mM)。
(可選)加入 1 M Tris-HCl (pH 8.7) 終止反應(每 100 μg 蛋白加 10 μL)。
用超濾柱(如 G-25)或透析去除游離染料,純化標記產(chǎn)物。
標記后蛋白加入 1% BSA 或 50% 甘油,-20℃ 避光保存可穩(wěn)定半年。
凋亡檢測(Annexin V 偶聯(lián)物):
用 Annexin-binding buffer 重懸細胞(1×10?/mL),加入 5 μL Andy Fluor 488 Annexin V,避光孵育 15 分鐘后流式檢測。
用 10 μM EdU 孵育細胞 2 小時,固定后通過點擊反應與 BODIPY 488 疊氮化物偶聯(lián)。
【相關試劑】
細胞膜熒光探針DiD標記液 CAS 127274-91-3
pH熒光探針Protonex Red 600-大腸桿菌偶聯(lián)物
pH熒光探針Protonex Red 670-大腸桿菌偶聯(lián)物
pH熒光探針Protonex Red 670-酵母多糖A偶聯(lián)物
pH熒光探針Protonex Green 500-大腸桿菌偶聯(lián)物