試劑中英文名稱：pGBKT7-Lam Vector 酵母雙雜交對(duì)照載體
儲(chǔ)存：-20℃干燥避光保存至少1年，冰袋運(yùn)輸。
一、Product description：（pGBKT7-Lam酵母雙雜交對(duì)照載體）
pGBKT7-Lam是陰性對(duì)照質(zhì)粒,能編碼人Lamin C蛋白(a.a.66-230)和GAL4 DNA-BD(a.a.1-147)的融合蛋白。
其核心功能是驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中是否存在假陽(yáng)性相互作用背景，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的特異性。
pGBKT7-Lam is a negative control plasmid that encodes a fusion protein of human Lamin C protein (a.a.66-230) and GAL4 DNA-BD(a.a.1-147).
Its core function is to verify whether there is a false positive interaction background in the experiment and ensure the specificity of the experimental results.
作為標(biāo)準(zhǔn)化對(duì)照工具，可避免用戶重復(fù)構(gòu)建陰性對(duì)照載體，提升實(shí)驗(yàn)效率。
（1）GAL4 DNA 結(jié)合域（DNA-BD）
包含 GAL4 蛋白的 N 端 1-147 位氨基酸，負(fù)責(zé)結(jié)合酵母基因組中的上游激活序列（UAS），是酵母雙雜交系統(tǒng)的核心結(jié)構(gòu)域。
插入 Lamin C 的 66-230 位氨基酸片段，該蛋白定位在細(xì)胞核內(nèi)，且極少與其他蛋白隨機(jī)互作，因此適合作為陰性對(duì)照。
位于融合蛋白的 N 端，便于通過(guò) Western blot 或免疫沉淀等技術(shù)檢測(cè)蛋白表達(dá)。
ADH1 啟動(dòng)子：驅(qū)動(dòng)融合蛋白在酵母中組成型表達(dá)。
（5）T7 啟動(dòng)子：支持體外轉(zhuǎn)錄/翻譯實(shí)驗(yàn)。
抗性標(biāo)記：大腸桿菌中通過(guò)Kan篩選，酵母中通過(guò) TRP1 基因補(bǔ)償se氨酸缺陷，實(shí)現(xiàn)營(yíng)養(yǎng)選擇。
在酵母中通過(guò) 2μori 實(shí)現(xiàn)高拷貝復(fù)制，在大腸桿菌中通過(guò) pUCori 復(fù)制。
二、酵母雙雜交原理是怎樣的？（pGBKT7-Lam酵母雙雜交對(duì)照載體）
酵母雙雜交系統(tǒng)的建立是基于對(duì)真核生物轉(zhuǎn)錄調(diào)控過(guò)程的認(rèn)識(shí)。
真核生物中基因轉(zhuǎn)錄需要轉(zhuǎn)錄激活因子的參與，真核生物的轉(zhuǎn)錄激活因子含有兩個(gè)不同的結(jié)構(gòu)域：DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域和DNA轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域，這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域可以獨(dú)立分開，功能互不影響。
BD和AD分別單獨(dú)作用并不能激活轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，只有當(dāng)二者在空間上充分接近時(shí)，才呈現(xiàn)完整的轉(zhuǎn)錄激活因子活性，使下游基因得到轉(zhuǎn)錄。
根據(jù)這一原理，可設(shè)計(jì)酵母雙雜交系統(tǒng)。
POF將兩待研究蛋白（蛋白X與蛋白Y）分別與BD、AD結(jié)構(gòu)域構(gòu)建融合質(zhì)粒。
將構(gòu)建好的兩個(gè)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入同一酵母細(xì)胞中表達(dá)，如果兩蛋白之間不存在相互作用，則下游基因（報(bào)告基因）不會(huì)轉(zhuǎn)錄表達(dá)；如果兩個(gè)蛋白存在相互作用,則BD與AD兩結(jié)構(gòu)域空間上很接近，從而下游基因（報(bào)告基因）得到轉(zhuǎn)錄。
判斷通過(guò)報(bào)告基因表達(dá)與否,即可判斷兩蛋白之間是否存在相互作用。
用于科研相關(guān)領(lǐng)域，不能用于人體實(shí)驗(yàn)！
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