試劑中英文名稱(chēng):JM109(DE3) Chemically Competent Cell化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
儲(chǔ)存:-20℃干燥避光保存至少1年,冰袋運(yùn)輸。
轉(zhuǎn)化效率:≥10? cfu/μg DNA(以pUC19檢測(cè))
一、Description:(JM109(DE3)感受態(tài)細(xì)胞)
Intact Genomics JM109-DE3 chemically competent E. coli cells are suitable for high-efficiency transformation in a wide variety of applications such as cloning and sub-cloning.
JM109-DE3 is usefu for the high-level expression of genes cloned into vectors for the expression of sequence downstream from the T7 promoter.
Intact Genomics JM109-DE3 化學(xué)感受態(tài)大腸桿菌細(xì)胞適用于克隆和亞克隆等多種應(yīng)用中的高效轉(zhuǎn)化。
JM109-DE3 可用于克隆到載體中的基因的高水平表達(dá),以表達(dá) T7 啟動(dòng)子下游的序列。
轉(zhuǎn)化效率普遍≥10? cfu/μg DNA,部分產(chǎn)品可達(dá)5×10? cfu/μg。
適用于質(zhì)粒DNA的快速克隆、亞克隆及外源基因表達(dá)。
基因型包含endA1、recA1等突變,提升質(zhì)粒穩(wěn)定性與純度。
染色體整合λ噬菌體DE3區(qū),表達(dá)T7 RNA聚合酶,支持T7啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的蛋白表達(dá)系統(tǒng)。
即用型設(shè)計(jì),冰上解凍后可直接用于轉(zhuǎn)化。
配套pUC19對(duì)照質(zhì)粒和復(fù)蘇液,簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)流程。
二、轉(zhuǎn)換(JM109(DE3)感受態(tài)細(xì)胞)
(1)從-80℃冰箱中取出感受態(tài)細(xì)胞,并在濕冰上解凍(10-15分鐘()
(2) 將1-5μl(1pg-100ng() DNA等分到冰上的冷凍微量離心管中。
(3) 細(xì)胞解凍后,將50μl細(xì)胞加入冰上的每個(gè)DNA管中,輕敲45次輕輕混合。對(duì)于pUC19對(duì)照,在加入50μl細(xì)胞之前,將1μl(10pg/μl()DNA添加到冷凍的微量離心管中。敲擊充分混合。不要上下移液或渦旋混合,這會(huì)傷害細(xì)胞并降低轉(zhuǎn)化效
(5)冰孵育30分鐘后,在42℃下對(duì)細(xì)胞進(jìn)行熱休克45秒
(7)向每個(gè)試管中加入950μl回收培養(yǎng)基或任何其他選擇的培養(yǎng)基。
(8) 將試管在37℃下以210rpm孵育1小時(shí)。
(9) 在預(yù)熱的選擇板上從每次轉(zhuǎn)化中涂抹50μl至200μl。我們建議鋪板兩種不同的體積,以確保至少一個(gè)板具有間隔良好的菌落。對(duì)于pUC19對(duì)照,將50μl接種在含有100μg/ml氮芐青霉su的LB平板上。使用滅菌的撤布器或高壓滅菌的大腸桿菌滾鍍珠均勻涂
用于科研相關(guān)領(lǐng)域,不能用于人體實(shí)驗(yàn)!
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