【??參數(shù)信息】
英文名稱:OverExpress C43(DE3) Chemically Competent Cell
中文名稱:OverExpress C43(DE3)大腸桿菌化學感受態(tài)細胞,OverExpress C43(DE3)化學感受態(tài)細胞
規(guī)格:50×100μl,10x100ul
【簡單概述】
OverExpress C43(DE3)是一種經(jīng)過基因工程改造的大腸桿菌(E. coli)菌株,專為高效表達毒性蛋白或疏水性蛋白而設(shè)計。
OverExpress C43(DE3)化學感受態(tài)細胞,其核心特點包括:
源自BL21(DE3)菌株,通過篩選獲得至少兩個未知突變,這些突變使其能耐受并高效表達對普通大腸桿菌有毒的蛋白質(zhì)。
基因型為: F? ompT hsdSB (rB? mB?) gal dcm (DE3)。
用于表達真核/原核生物中的毒性蛋白(如膜蛋白、疏水性蛋白)及病毒、哺乳動物等來源的重組蛋白。
兼容pET、pGEX、pMAL等T7啟動子驅(qū)動的表達載體。
【使用方法】
解凍感受態(tài)細胞:將C43(DE3)感受態(tài)細胞從-80°C冰箱取出,置于冰上緩慢解凍(約5-10分鐘)。
加入質(zhì)粒DNA:取50μL解凍細胞,加入1-5μL重組質(zhì)粒DNA(推薦質(zhì)粒濃度≤10 ng/μL),輕柔混勻后冰浴30分鐘。
熱激處理:將混合液置于42°C水浴中精確熱激45秒,迅速放回冰浴2分鐘。
復(fù)蘇培養(yǎng):加入450μL預(yù)熱的SOC或LB培養(yǎng)基,37°C、200 rpm振蕩培養(yǎng)60分鐘以恢復(fù)細胞活性。
涂布抗生素平板:取100-200μL復(fù)蘇菌液涂布于含對應(yīng)抗生素的LB瓊脂平板。
培養(yǎng):37°C倒置培養(yǎng)12-16小時,直至單菌落出現(xiàn)。
接種與培養(yǎng):挑取單菌落接種至含抗生素的LB培養(yǎng)基,37°C振蕩培養(yǎng)至OD600≈0.6(對數(shù)中期)。
誘導(dǎo)劑:加入IPTG(終濃度0.1-1 mM)。
溫度與時間:通常降低溫度至25-30°C,誘導(dǎo)4-16小時。
C43(DE3)衍生自BL21(DE3),通過突變篩選獲得對膜蛋白毒性的高耐受性,尤其適合表達膜蛋白。
其轉(zhuǎn)錄組上調(diào)了膜蛋白生物合成相關(guān)基因,促進正確折疊與膜整合。
質(zhì)粒選擇:避免使用含lacI的誘導(dǎo)型載體,以免抑制菌株的表達調(diào)控優(yōu)勢。
替代方案:若需更精細調(diào)控表達,可考慮Lemo21(DE3)菌株。
【相關(guān)試劑】
iFluor 680 amine iFluor 680 胺
iFluor 680 hydrazide iFluor 680酰肼
Pan-caspase Inhibitor Z-VAD-FMK
Z-YVAD-FMK (Caspase-1 inhibitor)
Z-DEVD-FMK (Caspase-3 inhibitor)
CCCP (50 mM)凋亡誘導(dǎo)劑/質(zhì)子載體
Ac-DEVD-CHO (Caspase-3/7 inhibitor)
SYBR Green I Nucleic Acid Stain (PCR Grade, 10,000×)
EPI400 Electrocompetent cell 大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞