ATCC15834農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞，為植物轉(zhuǎn)化設(shè)計，攜帶pRi15834質(zhì)粒，誘導(dǎo)藥用植物毛狀根。經(jīng)工藝優(yōu)化，適合大質(zhì)粒轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化效率高，操作簡便，低溫運輸，-20℃避光儲存。

詳細(xì)介紹

【??參數(shù)信息】

英文名稱：ATCC15834 Electrocompetent Cell

中文名稱：ATCC15834農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

運輸：低溫運輸

規(guī)格：10×50μl，50×50μl

純度：≥95%

儲存條件：-20℃避光干燥

生產(chǎn)廠商：西安強化生物科技

【簡單概述】

ATCC15834農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞是一種發(fā)根農(nóng)桿菌菌株，其核心特征包括：

基因型：攜帶天然 pRi15834 農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒，賦予其特定的植物轉(zhuǎn)化能力。

宿主范圍：適用于多種植物（雙子葉植物和部分單子葉植物），專長于誘導(dǎo)藥用植物的毛狀根。

制備工藝：經(jīng)特殊工藝優(yōu)化，適合大質(zhì)粒轉(zhuǎn)化（如基因組文庫），轉(zhuǎn)化效率高。

【使用方法】

一、實驗前準(zhǔn)備

安全防護(hù)：穿實驗服并戴一次性手套操作。

電擊杯處理：

將0.1 cm電擊杯和杯蓋從75%乙醇儲存液中取出，倒置于干凈吸水紙上5分鐘瀝干水分，再正置5分鐘使乙醇充分揮發(fā)。

立即插入碎冰中壓實，杯頂離冰面0.5 cm以便蓋蓋，冰浴5分鐘充分降溫。

感受態(tài)細(xì)胞解凍：取-80℃保存的感受態(tài)細(xì)胞插入冰中5分鐘，待融化。

二、質(zhì)粒與感受態(tài)細(xì)胞混合

質(zhì)粒要求：

質(zhì)粒DNA需用試劑盒抽提，雙蒸水溶解。

用量建議：使用需預(yù)實驗優(yōu)化，推薦0.01-1 μg質(zhì)粒DNA/100 μl感受態(tài)細(xì)胞。

混合操作：

將質(zhì)粒加入解凍的感受態(tài)細(xì)胞中，用移液槍輕輕吹打混勻（避免氣泡）。

冰上靜置5分鐘。

三、電轉(zhuǎn)操作

電擊參數(shù)設(shè)置：

電容（C）= 25 μF，電阻（PC）= 200 ohm，電壓（V）= 2400 V（Bio-rad電轉(zhuǎn)儀參考參數(shù)）。

電擊步驟：

將混合液快速轉(zhuǎn)移至預(yù)冷的電擊杯中，蓋緊杯蓋。

吸干電擊杯外壁水分，放入電轉(zhuǎn)槽。

啟動電擊，完成后立即將電擊杯插回冰中冷卻2分鐘。

四、復(fù)蘇與培養(yǎng)

復(fù)蘇培養(yǎng)：

向電擊杯中加入700 μl 無抗生素的TY液體培養(yǎng)基。

用移液槍吸出混合液，轉(zhuǎn)移至無菌離心管。

28℃、200 rpm振蕩培養(yǎng)2-3小時。

涂板與培養(yǎng)：

6000 rpm離心1分鐘，棄上清（留約100 μl）。

輕輕吹打重懸菌體，涂布于含 Kan（50 μg/ml）的TY平板上。

28℃倒置培養(yǎng)48-72小時。

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以上資料由西安強化生物科技有限公司xxn整理！

本試劑僅適用于科研實驗，敬請知悉。

關(guān)鍵詞：離心管

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