K599農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞，是發(fā)根農(nóng)桿菌基因工程工具，攜帶pRi2659質(zhì)粒，具有鏈霉su抗性，廣泛感染多種植物。經(jīng)特殊工藝優(yōu)化，轉(zhuǎn)化效率高，配套提供對照質(zhì)粒，適用于毛狀根轉(zhuǎn)化研究。

詳細介紹

【??參數(shù)信息】

英文名稱：K599 Electrocompetent Cell

中文名稱：K599農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞

規(guī)格：10ul,10x50ul

運輸：低溫運輸

純度：≥95%

儲存條件：-20℃避光干燥

生產(chǎn)廠商：西安強化生物科技

【簡單概述】

K599農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞是一種發(fā)根農(nóng)桿菌（Agrobacterium rhizogenes）的基因工程工具，具有以下核心特征：

菌株特性：

攜帶 pRi2659農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒（agropine type Ri plasmid），賦予其strR。

屬于革蘭氏陰性土壤細菌，可感染多種植物（如雙子葉植物、單子葉植物及裸子植物），宿主范圍廣泛（葫蘆科、豆科、茄科等）。

從黃瓜中分離，常用于植物毛狀根轉(zhuǎn)化研究。

設計：

經(jīng)特殊工藝制備，用于大質(zhì)粒轉(zhuǎn)化優(yōu)化，轉(zhuǎn)化效率高。

配套提供對照質(zhì)粒。

【實驗步驟】

一、實驗前準備

材料與試劑

K599電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞（-80℃保存，避免反復凍融）

純化質(zhì)粒DNA（建議試劑盒抽提，雙蒸水溶解）

預冷的0.1 cm電擊杯（Gene Pulser®規(guī)格）

無抗生素的YEB/LB液體培養(yǎng)基

含相應抗生素的YEB/LB固體平板

冰浴設備、電轉(zhuǎn)儀（如Bio-rad）

電擊杯預處理

從75%乙醇儲存液中取出電擊杯，倒置瀝干5分鐘，再正置5分鐘使乙醇揮發(fā)干凈

立即插入碎冰中預冷5分鐘，壓實冰面，杯頂離冰面0.5 cm以便蓋蓋

二、操作步驟

感受態(tài)細胞與質(zhì)?；旌?/span>

取-80℃保存的K599感受態(tài)細胞，手心輕握部分融化后插入冰浴5分鐘

每50μl感受態(tài)細胞加入0.1-1μg質(zhì)粒DNA（體積≤感受態(tài)體積的1/10，即≤5μl）

用槍頭輕輕吹打混勻（避免氣泡），冰浴靜置1分鐘

電擊轉(zhuǎn)化

將混合液快速轉(zhuǎn)移至預冷的電擊杯中，蓋緊杯蓋

設置電轉(zhuǎn)儀參數(shù)（以下為常用參數(shù)，可選其一）：

Bio-rad推薦：電壓2400-2500V，電容25μF，電阻200Ω

或參考儀器自帶農(nóng)桿菌Protocol

啟動電擊，完成后迅速將電擊杯插入冰中冷卻

復蘇培養(yǎng)

向電擊杯中加入700-900μl無抗生素的YEB/LB培養(yǎng)基

用槍吹吸混勻，轉(zhuǎn)移至無菌離心管中

28℃、150-200 rpm振蕩培養(yǎng)2-3小時

涂布與培養(yǎng)

6000 rpm離心1分鐘，棄上清（保留約100μl液體）

輕柔吹打重懸菌體，涂布于含抗生素的YEB/LB平板

28℃倒置培養(yǎng)2-3天，觀察單菌落。

【相關試劑】

MPP+ iodide

NAD氧化型輔酶I

3-Estradiol β-峨二醇

GV3101 Electrocompetent cell

AGL1 Electrocompetent cell

EHA101 Chemically Competent Cell

EHA105 Chemically Competent Cell

LBA4404 Chemically Competent Cell

AGL1 Chemically Competent Cell

GV3101 Chemically Competent Cell

MSU440 Chemically Competent Cell

Ar 1193 Electrocompetent Cell

ATCC15834 Electrocompetent Cell

Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit

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本試劑僅適用于科研實驗，敬請知悉。

關鍵詞：離心管

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K599農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞