【??參數(shù)信息】
英文名稱:Benzonase Nuclease(不含標(biāo)簽)
活性單位定義:在37℃,pH8.0反應(yīng)條件,30min內(nèi)使△A260吸收值變化1.0所用的酶量定義為一個(gè)活性單位(U)。
生產(chǎn)廠商:西安強(qiáng)化生物科技
【簡單概述】
Benzonase Nuclease(不含標(biāo)簽)。一種非特異性核酸內(nèi)切酶。
由兩個(gè)一樣的亞基構(gòu)成,每個(gè)亞基大約30kDa,含有245個(gè)氨基酸和兩個(gè)必需的二硫鍵。
可以切割和降解各種形式的DNA和RNA(單鏈,雙鏈,線性,環(huán)狀,或超螺旋形式),生成含有5’-磷酸末端的3-5個(gè)寡核苷酸殘基片段,并且在很多種操作條件下有效。
對(duì)核酸堿基序列無特異性要求,可在鏈內(nèi)任意核苷酸間進(jìn)行切割,廣泛用于去除生物制品中的核酸。
本品經(jīng)基因工程改造的原核表達(dá)純化所得,不帶任何標(biāo)簽。
能有效降低蛋白樣本粘度,去除蛋白樣品中核酸的污染,無蛋白酶活性殘留,核酸酶活性高達(dá)1×106 U/mg蛋白。
本品未經(jīng)特殊的內(nèi)毒素去除處理,適用于常規(guī)的科研應(yīng)用,包括常規(guī)蛋白樣本(非藥物蛋白)提取時(shí)核酸污染的去除,2D凝膠電泳蛋白樣本的制備,WB,WBIP等。
【使用方法】
去除培養(yǎng)基后用 PBS 清洗,每 1 mL 裂解液(如 RIPA) 加入 1–5 μL Benzonase Nuclease,室溫或冰上孵育 5–30 分鐘,離心取上清進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。
取 30–100 mg 組織充分研磨,加入 100–200 μL 裂解液 和 0.5–5 μL Benzonase Nuclease,室溫或冰上孵育 5–30 分鐘,離心取上清。
裂解后每 100 μL 裂解液 加入 1–5 μL 酶,室溫孵育 30 分鐘,離心取上清。
反應(yīng)體系:建議 pH 6–8,Mg2?終濃度 5–10 mM。
酶用量:常規(guī)推薦稀釋比例 1:1000–1:20,000(按酶活性 1000 U/μL 計(jì))。
(例:若目標(biāo)濃度 25 U/mL,則每毫升樣品加 0.025 μL 酶液 )
溫度與時(shí)間:有效溫度 0–42°C( 37°C),孵育時(shí)間可依需求延長以提高效率。
適用于科研級(jí)蛋白純化、降低樣本黏度、去除核酸污染(如 WB、IP、2D 電泳),不適用于內(nèi)毒素敏感的實(shí)驗(yàn)(未特殊去內(nèi)毒素)。
使用需預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化酶量、溫度及時(shí)間。
【相關(guān)試劑】
RIPA Lysis Buffer (Strong)RIPA裂解液(強(qiáng))
RIPA Lysis Buffer(Medium)RIPA裂解液(中)
RIPA Lysis Buffer (Weak) RIPA裂解液(弱)
Acid-fast Stain Kit (Kinyoun Cold Method)
Acid-fast Stain Kit (Auramine O Method)
Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit
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本試劑僅適用于科研實(shí)驗(yàn),敬請(qǐng)知悉。