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DH5α大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

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參考價:￥500 - ￥15000 /mg

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更新時間：2025-08-26 08:33:28瀏覽次數(shù)：242次

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西安強(qiáng)化生物科技有限公司

經(jīng)營模式：生產(chǎn)廠家

商鋪產(chǎn)品：496條

所在地區(qū)：陜西西安市

聯(lián)系人：李杰（經(jīng)理）

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產(chǎn)品簡介

DH5α大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞，是一種用于電擊轉(zhuǎn)化的大腸桿菌菌株，通過特殊工藝處理后，處于“感受態(tài)"。

詳細(xì)介紹

【??參數(shù)信息】

英文名稱：DH5α Electrocompetent cell 大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

中文名稱：DH5α大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

適用性：適用于懸浮細(xì)胞、貼壁細(xì)胞。

運(yùn)輸：干冰運(yùn)輸

純度：≥95%

儲存條件：-20℃避光干燥

生產(chǎn)廠商：西安強(qiáng)化生物科技

【簡單概述】

DH5α大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞是一種用于電擊轉(zhuǎn)化的大腸桿菌菌株，通過特殊工藝處理后，處于“感受態(tài)"。

（感受態(tài)即細(xì)胞膜通透性暫時改變，允許外源DNA高效進(jìn)入的狀態(tài)）。

主要特點(diǎn)包括：

適用性：僅適用于電擊轉(zhuǎn)化，不能用于熱激轉(zhuǎn)化。

基因型優(yōu)勢：

recA1 突變：抑制同源重組，保證外源DNA穩(wěn)定性。

endA1 突變：消除核酸內(nèi)切酶活性，提高質(zhì)粒DNA純度。

lacZΔM15 缺失：支持藍(lán)白斑篩選。

甲基化保護(hù)突變（如 mcrA、mcrBC、mrr-、hsdRMS）：防止甲基化DNA被降解，適合克隆甲基化修飾的DNA。

與其他感受態(tài)細(xì)胞的區(qū)別

與化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞的區(qū)別：

電轉(zhuǎn)感受態(tài)僅支持電穿孔法，而化學(xué)感受態(tài)需Ca2?處理并通過熱激轉(zhuǎn)化。

電轉(zhuǎn)法效率通常比化學(xué)法高 10–100倍。

與普通DH5α菌株的區(qū)別：

電轉(zhuǎn)菌株添加了增強(qiáng)電轉(zhuǎn)效率的突變。

【使用方法】

一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

材料與試劑

DH5α電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

預(yù)冷的0.1 cm或0.2 cm電擊杯

無菌DNA樣品

無菌SOC或LB培養(yǎng)基

含抗生素的LB瓊脂平板

冰浴設(shè)備、無菌吸頭、離心管等

安全操作

穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套。

所有操作需在無菌條件下進(jìn)行。

二、實(shí)驗(yàn)步驟

1. 電擊杯預(yù)處理

從儲存液中取出電擊杯和杯蓋，倒置在干凈吸水紙上5分鐘瀝干水分，再正置5分鐘使乙醇揮發(fā)。

立即插入冰中預(yù)冷5分鐘，確保杯頂離冰面0.5 cm以便蓋蓋。

2. 感受態(tài)細(xì)胞解凍

從-80℃取出感受態(tài)細(xì)胞，插入冰中靜置5分鐘至融化（避免反復(fù)凍融）。

3. DNA與細(xì)胞混合

將DNA（≤5 μl）加入50-100 μl感受態(tài)細(xì)胞中，輕柔吹打混勻（避免氣泡）。

注意：

若DNA含高鹽離子（如連接產(chǎn)物），需純化或乙醇沉淀后重懸于ddH?O。

使用剪去的吸頭（減少剪切力）混勻。

4. 電擊轉(zhuǎn)化

將混合液快速轉(zhuǎn)移至預(yù)冷的電擊杯中，確保液面平整無氣泡。

設(shè)置電擊參數(shù)（典型值）：

電壓：2.4–2.5 kV

電阻：200 Ω

電容：25 μF

啟動電擊程序（電擊時間由儀器自動計(jì)算）。

5. 復(fù)蘇培養(yǎng)

電擊后立即加入950 μl預(yù)熱的SOC或LB培養(yǎng)基（無抗生素）。

輕柔吹吸混勻，轉(zhuǎn)移至無菌離心管。

37℃搖床（150-250 rpm）培養(yǎng)45-60分鐘，使細(xì)胞恢復(fù)。

6. 涂板與培養(yǎng)

取100-200 μl菌液涂布于含抗生素的LB平板上（根據(jù)平板大小調(diào)整用量）：

90 mm平板：涂布100 μl

55 mm平板：涂布50 μl

連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化建議：離心濃縮菌液，棄大部分上清，取100-200 μl涂布。

靜置至液體吸收，倒置平板，37℃培養(yǎng)12-18小時。

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本試劑僅適用于科研實(shí)驗(yàn)，敬請知悉。

關(guān)鍵詞：離心管

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DH5α大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞