MSU440農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞，是一種高效農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞，適用于大質(zhì)粒轉(zhuǎn)化，具有廣泛宿主范圍和抗性，操作需嚴(yán)格低溫?zé)o菌，轉(zhuǎn)化效率受質(zhì)粒純度和體積影響。

詳細(xì)介紹

【??參數(shù)信息】

英文名稱：MSU440 Electrocompetent Cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

中文名稱：MSU440農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

形態(tài)：經(jīng)特殊工藝制備成電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞，適用于大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。

規(guī)格：通常為 50μl/支，包裝形式包括10×50μl或50×50μl。

運輸：低溫運輸。

純度：≥95%

儲存條件：-20℃避光干燥

生產(chǎn)廠商：西安強化生物科技

【簡單概述】

MSU440農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞是一種應(yīng)用于農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，屬于發(fā)根農(nóng)桿菌菌株。

其核心特征包括：

菌株特性：

革蘭氏陰性土壤細(xì)菌，具有廣泛的宿主范圍（可感染大多數(shù)雙子葉植物、部分單子葉植物及裸子植物，如玉米、茶樹、煙草等）。

天然攜帶農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒（agropine-type Ri plasmid），賦予其Str。

基因型明確為 Agrobacterium rhizogenes (Str) MSU440 Ri 。

【使用方法】

（1）將0.1 cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈吸水紙上5min，待其瀝干水分，正置5min，使乙醇充分揮發(fā)干凈，立即插入冰中，壓實冰面，電極杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5min使其充分降溫。

（2）取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞插入冰中5min，待其融化。

（3）往50μl感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入0.01~1μg（體積不大于6μl）質(zhì)粒DNA，用手打管底使其混勻，立即插入冰中。用槍輕輕吹打混勻感受態(tài)細(xì)胞-質(zhì)粒之后快速轉(zhuǎn)移到電擊杯中，蓋上杯蓋，空管保留待用。

（4）啟動電轉(zhuǎn)儀，設(shè)置參數(shù)：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V，將電擊杯從冰中取出，吸水紙吸干外表面水分，快速放入電轉(zhuǎn)槽中，啟動電擊，電擊完成快速插入冰中。

（5）加入1ml無抗生素的TY并轉(zhuǎn)移到感受態(tài)空管中，于28℃振蕩培養(yǎng)2~3h。

（6）6,000rpm離心1min，留取100ul左右上清，之后用槍輕輕吹打重懸菌體。之后加到含相應(yīng)抗生素的TY平板上，用無菌玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開。室溫正置10 min，待液體被吸收后，倒置平板，28℃培養(yǎng)2-3天。

【注意事項】

（1）感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-80℃，不可反復(fù)凍融和放置時間過長，以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。

（2）整個轉(zhuǎn)化操作，嚴(yán)格根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件要求進(jìn)行。

（3）加入質(zhì)粒的體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10。質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機物污染，會導(dǎo)致轉(zhuǎn)化效率急劇下降。質(zhì)粒增大一倍，轉(zhuǎn)化效率下降一個數(shù)量級。

（4）為確保轉(zhuǎn)化效率，整個操作過程應(yīng)盡量輕柔，并保持低溫。

（5）電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞中不可混入氣泡，轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少最終涂板用量。

（6）平板上克隆密度過大時，由于營養(yǎng)不足，克隆生長變慢，菌落變小。為獲得大菌落，應(yīng)減少質(zhì)粒用量。

（7）MSU440具抗性，不可用于具抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。

（8）為了保證轉(zhuǎn)化效率，發(fā)根農(nóng)桿菌的培養(yǎng)務(wù)必使用TY培養(yǎng)基。

（9）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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本試劑僅適用于科研實驗，敬請知悉。

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MSU440農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞