【??參數(shù)信息】
中文名稱:quan能核酸酶(帶Strep標(biāo)簽)
活性單位定義:在37℃,pH8.0反應(yīng)條件,30min內(nèi)使△A260值降低1.0所用的酶量定義為一個活性單位(U)。
生產(chǎn)廠商:西安強(qiáng)化生物科技
【簡單概述】
Benzonase,一種非特異性核酸內(nèi)切酶,由兩個一樣的亞基構(gòu)成,每個亞基大約30kDa,含有245個氨基酸和兩個必需的二硫鍵。
可以切割和降解各種形式的DNA和RNA(單鏈,雙鏈,線性,環(huán)狀,或超螺旋形式),生成含有5’-磷酸末端的3-5個寡核苷酸殘基片段,并且在很多種操作條件下有效。
對核酸堿基序列無特異性要求,可在鏈內(nèi)任意核苷酸間進(jìn)行切割,廣泛用于去除生物制品中的核酸。
本品經(jīng)基因工程改造的原核表達(dá)純化所得,攜帶Strep-tag II標(biāo)簽(Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys),核酸消化后可用牢固結(jié)合Strep-tag II的磁珠或樹脂來去除。
Strep-tag II標(biāo)簽很小,對酶的結(jié)合和活性基本無影響。
本品quan能核酸酶(帶Strep標(biāo)簽)能降低蛋白樣本粘度,去除蛋白樣品中核酸的污染,無蛋白酶活性殘留,核酸酶活性高達(dá)1×106 U/mg蛋白。
本品未經(jīng)特殊的內(nèi)毒素去除處理,適用于常規(guī)的科研應(yīng)用,包括常規(guī)蛋白樣本提取時核酸污染的去除,2D凝膠電泳蛋白樣本的制備,WB,WB-IP等。
【使用方法】
裂解液體積:每100萬細(xì)胞使用100 μL裂解液(如RIPA)。
貼壁細(xì)胞:100 μL裂解液 + 1-5 μLquan能核酸酶。
懸浮細(xì)胞:同貼壁細(xì)胞或按1 mL裂解液 + 1-2 μL 酶。
貼壁細(xì)胞:棄培養(yǎng)基→PBS洗滌→加含酶的裂解液。
懸浮細(xì)胞:離心收集沉淀→重懸于含酶的裂解液。
室溫孵育 15-30分鐘(冰上可延長至30分鐘)。
12,000-14,000 ×g 離心 10-30分鐘,取上清用于下游實(shí)驗(yàn)。
酶添加量:每100-200 μL裂解液加 0.5-10 μL 酶(多數(shù)推薦1-5 μL)。
12,000 ×g 離心 10-30分鐘,取上清。
菌體處理:離心收集菌體→重懸于裂解液(體積比為1:10)。
12,000 rpm 離心 10-30分鐘,取上清。
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