DyLight 488標(biāo)記的番茄凝集素(LEL, TL),是一種綠色熒光探針,專用于糖生物學(xué)研究,可高親和力結(jié)合N-乙酰葡糖胺,激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)為493/518 nm,適用于組織切片、血管灌注和細(xì)胞染色,推薦工作濃度5–20 μg/mL。
【??參數(shù)信息】
英文名稱:DyLight 488 Labeled Lycopersicon Esculentum (Tomato) Lectin (LEL, TL)
中文名稱:DyLight 488標(biāo)記的番茄凝集素(LEL, TL)
糖特異性:[GlcNAc]1-3, N-Acetylglucosamine
生產(chǎn)廠商:西安強(qiáng)化生物科技
【簡(jiǎn)單概述】
DyLight 488標(biāo)記的番茄凝集素(LEL, TL)是一種熒光標(biāo)記的糖蛋白探針,來(lái)源于番茄(Lycopersicon esculentum)。
其核心成分為番茄凝集素(LEL或TL),通過(guò)共價(jià)結(jié)合熒光染料DyLight 488形成復(fù)合物。
結(jié)構(gòu):?jiǎn)蝸喕堑鞍?,含約50%的阿拉伯糖和半乳糖,在溶液中可能形成多聚體。
糖結(jié)合特異性:無(wú)血型特異性,但可高親和力結(jié)合 N-乙酰-β-D-葡糖胺寡聚體,抑制/洗脫糖為殼多糖水解物。
熒光特性:激發(fā)波長(zhǎng)493 nm,發(fā)射波長(zhǎng)518 nm,呈綠色熒光。
【實(shí)驗(yàn)步驟(通用流程)】
工作濃度:5–20 µg/mL(推薦用PBS或含1% BSA的緩沖液稀釋)。
儲(chǔ)存液:產(chǎn)品為1 mg/mL濃縮液,含10 mM HEPES、0.15 M NaCl、0.08% NaN3、0.1 mM CaCl2(pH 7.5),需避光保存于2–8°C(不可冷凍)。
滴加稀釋后的凝集素溶液,室溫避光孵育30–60分鐘。
PBS沖洗3次,每次5分鐘,去除未結(jié)合凝集素。
麻醉動(dòng)物,經(jīng)心內(nèi)或尾靜脈注射稀釋的凝集素溶液(如0.1 mg/mL)。
收集細(xì)胞(如血液或組織解離液),用PBS洗滌。
加入稀釋凝集素,冰上避光孵育15分鐘,PBS沖洗后直接觀察或分選。
激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng):493 nm激發(fā),518 nm發(fā)射(綠色熒光),使用FITC濾光片觀察 。
顯微鏡設(shè)置:熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡,避免長(zhǎng)時(shí)間光照以防淬滅。
陰性對(duì)照:加入抑制糖(如殼多糖水解物,Chitin Hydrolysate)預(yù)處理樣本,阻斷凝集素結(jié)合。
濃度優(yōu)化:實(shí)驗(yàn)建議梯度測(cè)試(5、10、20 µg/mL)以確定濃度 。
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